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红色毛癣菌表型和基因型稳定性的研究 硕士研究生：于晓虹 指导老师：杨国玲 教授 专业名称：皮肤病与性病学 摘 要 rubrum)是世界多数地区最常见的浅 红色毛癣菌(Trichophyton 部真菌病的病原菌。传统的分型及鉴定方法主要依靠形态学、生化学 的特征，这种表型方法不稳定、主观性较强且难以达到种内分型的目 的。目前开展较多的分子生物学鉴定方法从真菌的基因水平入手，是 一种客观性较强、敏感性较高、重复性好、并能达到种内分型的鉴定 的限制酶切分析(RFLP)，探针与DNA印迹杂交法等。本研究对红色毛 癣菌表型进行分型，并对这些菌株保存1年后重新进行表型分型；对 不同表型的部分菌株传代，对传代前后的菌株分别进行表型和基因型 的比较，探讨红色毛癣菌表型和基因型的稳定性。 材料和方法：1株标准株为美国标准培养标本ATCC294(American Culture Type Collection)保存菌株，红色毛癣菌的近期临床分离菌 株10株，本科真菌实验室保存的红色毛癣菌菌株207株。所有菌株采 用沙氏琼脂试管培养基培养，部分菌株同时采用沙氏液体培养基培养 以便DNA提取，菌株鉴定依据…菌落的特征及色素；大小分生孢子的形 态；尿素酶试验和毛发穿孔试验。传代采用沙氏琼脂试管培养基，间 隔4周传代1次，传3-4次。表型分型根据菌落的形态和色素，基因 型的测定采用随机引物PCR法和探针与DNA印迹杂交法。用CTAB法提 c c G^CCT 取DNA。随机引物为OPAAll[5J一^c G一川，印迹法以NS5和ITS4 (皮肤癣菌的特异性引物)为引物，以红色毛癣菌的标准株为模板， 扩增出rDNA的部分18S区、ITS I区、5．8S区和ITSII区为探针，并 ·t‘ 用随机引物法将探针用P”标记，与EcoRI酶切的基因组DNA杂交。 结果：(】)本实验207株红色毛癣菌共分离出4个表型，其中绒 粉末型(9．7％)，未见颗粒型。保存1年后有54株菌株发生形态变异， 总变异率为26．1％，沟纹型变异最小，相对稳定。(2)11株红色毛癣 菌传代后菌落形态或色素发生变异。(3)AP-PCR法测定基因型：红色 癣菌传代前后扩增的带型未发生变化。(4)探针与DNA印迹杂交法测 定基因型：原代(1代)与传代后的(2，3，4代)杂交带型一致，11 株红色毛癣菌均表现为3条带，可分为两种类型。 结论：(1)红色毛癣菌表型不稳定，在保存和传代过程中其菌落 形态或产色极易发生变异。(2)首次对原代红色毛癣菌表型进行变异 分析，原代中沟纹状变异率最低，具有统计学意义。(3)红色毛癣菌 传代后，基因型相对稳定，提示传代后的表型变异不影响菌种的基因 鉴定和基因研究。(4)实验室中保存的可引起特殊临床表现的红色毛 癣菌菌株，应从基因水平分型，因为这种方法稳定，能满足今后的科 研需要。 关键词：红色毛癣菌 表型 基因型稳定性 A on of and of genotype phenotype stability study rubrum Trichophyton Xiao-hong Postgraduate：Yu