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微生物学免疫学进展2008年第36卷第4期 ProginMicrobiolImmunolNov．2008，Vo1．36No．4 87 绿色荧光蛋白报告基因在病毒检测中的应用及研究 王 玲 综述；董关木 审校 (中国药品生物制品检定所，北京 100050) 摘 要：GFP为报告基因在病原检测中具有检测方便快速、灵敏度较高、无细胞损害作用等优点，因此正日益广泛 的应用于病原检测中。本文简述了GFP的特性，表达载体的构建及其在病原检测中的应用及研究进展。 关键词：绿色荧光蛋白；载体构建与鉴定；病原检测 中图分类号：R372 文献标识码：A 文章编号：1005-5673(2008)04．0087—04 报告基因是指一组编码易被检测的蛋白质或酶 与传统的报告基因如分泌型人胎盘碱性磷酸酶 的基因，将其与 目的基因融合表达后，可通过报告基 (Secretedalkalinephophatase，SEAP)基因、B一半乳糖 因的产物来 “报告”目的基因的表达调控…。报告 苷酶(13-ga1)基因、氯霉素乙酰转移酶 (Chromspheni— 基因作为一种有效的技术手段，目前已在农学、生物 colacetyltransferase，CAT)基因、荧光素 (Luciferase， 医学、生命科学和环境保护等领域发挥着重要作用。 LUC)基因等相比，GFP作为报告基因有其独特的优 近年来，来源于海洋生物水母 的绿色荧光蛋 白 势所在：①GFP的生物发光，不需外加底物，检测方 (Greenfluorescentprotein，GFP)，因其分子小、荧光 便；②GFP分子量相对较小，且活性形式为单体，易 稳定且无种属特异性、检测方便、对活细胞无伤害等 与其他蛋白融合表达；③GFP不干扰宿主细胞的生 优点，成为众多报告基因中的后起之秀，被称为 “活 长与功能，无活细胞毒性；④GFP发光性质稳定 ，即 细胞的分子探针”。已逐渐地取代传统的报告基 使在经化学或物理方法固定的组织中仍可检测；⑤ 因，被广泛用于转基因、分子生物学、细胞信号转导 GFP生物发光无种属组织依赖性。以上优点都使 等研究领域。 GFP成为 目前最受欢迎的报告基因，被广泛应用于 1 绿色荧光蛋 白报告基因的特性 转基因研究、细胞免疫检测、环境微生物学、肿瘤发 生物发光现象在海洋无脊椎动物中很普遍。如 病机制的研究、病原学检测等多个研究领域。 腔肠动物门的水母在受到机械刺激时会发出绿光， 2 绿色荧光蛋白报告基因表达载体的构建 后来经人们研究发现，这种生物发光现象是由一类 报告基因用于 “报告”目的基因的表达、目的基 叫绿色荧光蛋 白的蛋 白质引起的。自20世纪60年 因表达产物的细胞定位及与其他蛋白的相互作用等 代起，人们对GFP的生物化学性质及其发光机制进 时，最关键的一步就是报告基因表达载体的构建，以 行了大量的研究。 GFP为报告基因也是如此。因为 GFP的生物发光 GFP的cDNA全长约2．6kb，编码238个氨基酸 无种属组织特异性，所以人们可根据 自己的实验 目 残基，分子量为27×10，为一单体蛋白质。GFP发 的在不同表达系统中能随意构建表达GFP的表达 光无需另加外源底物，在 395—470nm波长光线激 载体 j。采用基因工程或 DNA体外重组技术将 目 发下就可发出绿光，GFP发光性质稳定，对热、碱性 的基因与报告基因连接在一起并辅以某些抗性基 pH、有机溶剂及大多数蛋白酶均可耐受，且没有光 因、启动子、增强子、真核或原核的复制起始点、 漂白现象 。这主要是由其一级结构决定的，GFP PolyA加尾信号等基因元件，共同构成GFP表达载 肽链