碱性芽孢杆菌木聚糖酶基因的克隆及表达.pdfVIP

234 2011，Vo1．32，No．05 良 品 科 学 ※生物工程 碱性芽孢杆菌木聚糖酶基因的克隆及表达 陈 娜，牛吉萍，申琳 (中国农业大学食品科学与营养]：程学院，北京 100083) 摘 要：本实验从广西红树林土壤中筛选出 株‘产木聚糖酶的耐碱菌HSL38，经过 16SrDNA鉴定，其与碱性芽孢 杆菌BacillushaloduransC一125(GenBank：NC_002570．2)的同源忖达到99％。参考BacillushaloduransC．125的 ．1，4． 木聚糖酶基因xynA设计引物，扩增}}{HSL38中的 一1，4一木聚糖酶基因xyl—BH．GIO，其 与xynA的同源性达到99％， 编码396个氨基酸残基(45．27kD)，属于糖基水解酶GH10家族。将xyl—BH—GIO基冈与表达载体pET一30ac(+)连接， 构建重组载体，转化大肠杆菌E．coliBL21(DE3)，IPTG诱导表达重组蛋 白。结果表明，在最佳诱导条件下，木 聚糖酶基因xyl-BH-GIO在大肠杆菌细胞 内高效表达，酶活力达到55．28U／mL，是原菌株HSL38发酵液酶活力的4倍。 关键词 ：碱性芽孢杆菌；木聚糖酶；克降；表达 CloningandExpressionofXylanaseGenefrom AlkaliphilicBacillushalodurans CHEN Na， SHENG Ji—ping，SHEN Lin (CollegeofFoodScienceandNutritionalEngineering，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing 100083，China) Abstract：IIlthisstudy，na alkaliphilicstrain(HSL38)producingxylanasewasisolatedfrommnagrovesoil，nadidentifiedas BacillushaloduransC一125(GenBank：NC 002570．21basedon16SrDNAnaalysis．whichrevealedasimilariytof99％．Specific primersbasdeonthe 一l，4一xylanasegene 以 ofBacillushaloduransC一125weredesigned，andthe 一1，4一xylanasegene(xyt- BH-G1D1from HSL38strainWasamplified．Sequenceanalysisshowde 99％similariytbetweenthexynAgenenadtheamplified geneencodingaprecursorof396aminoacidresidues(45．27leD)，whichbelongedtoglycosidehydrolasefamily10GH10．A recombinantexpressionplasmidwasconstructedbylinkingxyl—BH-GIOtotheexpressionplasmidpET一30a—c(+)，andthen transformedintoE coliBL21(DE3)．TheexpressionofrecombinantproteinwasachievedunderIPTGinduction．These investigationsindicatedthathte 一1,4一xylanasegenexyl—BH-GIOwashighlyexpressedinE coliBL21(DE3)cellsunderhte optimalinductionconditions，andna xylnaaseactivityof55．28U／mLwasobtained，whichexhibitde a4-foldenhancementwhen comparedtoth