ch03_培养细胞的生物学特征.pptVIP

原因: 　　操作时，细胞表面上与其它细胞及支持物黏附与连接的分子被破坏，细胞受到损伤 　　接种细胞: 适应，恢复，积累(代谢中间产物)　　组织块: 细胞迁移出　　 一般经数小时-几天 过程: 游离:悬浮,胞质回缩, 全部细胞变为圆球形 吸附:贴附底物,一般24小时内贴壁 潜伏期:可有运动活动,基本无增殖, 少见分裂相 影响因素： 滞留期的长短与： 　细胞种类、 　按种的细胞密度、 　培养条件等因素有关。 1.细胞密度接种分散细胞,接种的密度越大、数量越多，细胞群体越容易适应体外环境，潜伏期就短。相反，即便是在很小的培养空间内，如接种的细胞数量不够大，潜伏期仍会较长 2.细胞类型传代培养的细胞之潜伏期比原代培养的细胞短。 传代培养期的细胞,一般为6-24h;原代24-96h或更长单个细胞快,细胞大团慢,组织块慢连续细胞系与发生恶性转化的细胞(6-24h)比有限细胞系 　　　与正常二倍体细胞的短来源：胚胎组织:短,2天可见细胞生长　　　成体:长 3.细胞机能状态 不良者慢4.培养条件 培养液,pH,底物 不利:污染,有毒 特点：　 　是细胞增生最活跃、活力最旺盛的阶段 　培养物中细胞数量呈指数增长,细胞群体均一 　是理想的实验用细胞 判断细胞生长的指标：指数生长期内细胞分裂活动的程度(增殖活性)可作为判断细胞生长是否旺盛的重要指标 1.有丝分裂指数(MI): 　　指培养物中分裂相数量占全部细胞数量的百分比，统计时，每瓶至少需计数1000个细胞。　一般细胞的MI约为0.1－0.5%；原代培养物的MI比继代培养物低。连续细胞系和肿瘤细胞高，可达3%－5%。 判断细胞生长的指标： 2.细胞群体倍增时间:　培养物中细胞数量翻倍的平均时间 3.MTT法：反映细胞内一种酶活性程度 4.标记核苷酸(3H-TdR)掺入量：反映DNA 细胞生长一定阶段(指数生长期一般持续3－5 d）,即可长满培养器皿，相互汇合成片(铺满 confluence) 当细胞相互接触连接成片，出现接触抑制，接触抑制以后，虽然运动受抑制，但只要营养成分充足，仍可短期的分裂增殖，只有当细胞密度增大到一定程度，细胞便不再分裂增殖。为密度依赖性细胞生长抑制 当细胞分裂停止后，细胞数量即不再增加进入平台期 概述 细胞铺满后再1-2倍增, 进入细胞达饱和密度, 可存活仍有代谢活动，但基本不分裂，  细胞数量维持在某一水平上，生长活动停滞 特点 (1)细胞数量： 细胞达饱和密度，出现密度抑制。  停止生长原因: 细胞数量多、生长地区占满、营养消耗、培养液中代谢废物积聚渐多，细胞停止生长。　　即使经常更换培养液，细胞也会变性,从生长基质表面脱落、死亡唯有进行传代方可缓解。  (2)细胞活动小, 细胞膜的　活动小 (3)生长组分下降: 0－10% (4)及时传代：细胞已中毒，即使传代，也会影响下一代细胞的功能状况 2．指数增生期（Logarithmic growth Phase）：　　这是细胞增值最旺盛的阶段，细胞分裂相增多。指数增生期细胞分裂相数量可作为判定细胞生长旺盛与否的一个重要标志。一般以细胞分裂指数（Mitotic Index：MI）表示，即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。一般细胞的分裂指数介于0.1%～0.5%，初代细胞分裂指数低，连续细胞和肿瘤细胞分裂指数可高达3%～5%。 　　在接种细胞数量适宜情况下，指数增生期持续3～5天后，随细胞数量不断增多、生长空间渐趋减少、最后细胞相互接触汇合成片。细胞相互接触后，如培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动，这种现象称接触抑制（Contact Inhibition）。 　　细胞接触汇合成片后，虽发生接触抑制，只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。但当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制（Density Inhibition），导致细胞分裂停止。 3．停滞期（Stagnate Phase）：　　细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。此时细胞数量不再增加，故也称平台期（Plateau）。停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累、pH降低。此时需做分离培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变，重则从底物脱落死亡，故传代应越早越好。传代过晚（已有中毒迹象）能影响下一代细胞的机能状态。在这种情况下，虽进行了传代，因细胞已受损，需要恢复，至少还要再传1～2两代，通过换液淘汰死细胞和使受损轻微的细胞得以恢复后，才能再用。 　　体内细胞生长在