硒化修饰提高党参多糖免疫活性的的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会中兽医学会第八次全国代表大会暨2014年学术年会论文集483 硒化修饰提高党参多糖免疫活性的研究 秦韬1’2，王德云1，胡元亮’ (1南京农业大学中兽医学研究室，江苏，南京，210095『； 2福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室，福建福州350002) 体外试验，用MTT法比较9个硒化党参多糖对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响，以未修饰的CPPS为对照。体内试验， 选择体外试验显示活性较强的sCPPS2、sCPPS5、sCPPS83个修饰多糖为比较对象，取14日龄雏鸡180只随机均 分为6组，除空白对照组外用新城疫疫苗免疫，28日龄二免。在首次免疫的同时，4个多糖组分别每羽皮下注射1 0．5mL，免疫对照组和空白对照组注射等量生理盐水，每天1次，连续3 mg·mL一1的3个修饰多糖和未修饰的CPPS d。分别于首免后第7、14、2l、28d采血，测定淋巴细胞增殖和血清ND抗体效价。结果显示，在体外，各多糖 糖在大多数时间点能显著促进 组在大多数时间点的抗体效价显著高于免疫对照组，在一些时间点显著高于未修饰的CPPS组。以上结果表明，硒 化修饰能提高CPPS的增强免疫活性，sCPPS5．的作用最好，可以作为免疫增强剂的组分药。 关键词：党参多糖；硒化党参多糖：淋巴细胞增殖；血清抗体效价 党参是一种著名的中国传统中草药，党参多糖是党参的主要活性成分，现代药理学发现其具有 增强免疫、抗病毒、抗衰老、抗应激、调节脂代谢等作用”】。硒多糖是有机硒的一种，兼有硒和 多糖的活性，它比普通多糖具有更多和更强的生物活性，如免疫调节、抗癌、抗氧化和抗菌等作用 【4】，所以硒多糖越来越受到广泛的关注。本研究用硝酸-亚硒酸钠法对党参多糖进行硒化修饰，以 亚硒酸钠用量、反应温度和反应时间三因素、三水平按正交设计9种修饰条件，得到9个硒化党参 多糖sCPPSl～sCPPS9，比较了它们体外刺激鸡外周血淋巴细胞增殖和对新城疫苗免疫雏鸡外周血 淋巴细胞增殖和血清抗体效价的影响，以未修饰的CPPS为对照。本研究的目的旨在探讨硒化修饰 提高党参多糖增强免疫活性的可能性，筛选出活性最强的硒化党参多糖，为研制多糖类免疫佐剂提 供理论依据。 1材料与方法 1．1硒化党参多糖的制备 取党参用水煎醇沉法提取党参粗多糖，用Sevage法脱蛋白，过DEAE一52柱，冷冻干燥，得到 项目基金：国家科技支撑计划(2011BAD34802)，国家自然科学基金 作者简介：秦韬(1981-)，男，江苏宜兴人，博士研究生，主要研究中药药理学。E—miI：2010207031(-njau．edu．cn 枣通讯作者：胡元亮，教授，博士生导师。E—miI：YIhuOnjau．edu．cn． 484 中国畜牧兽医学会中兽医学分会第八次全国代表大会暨2014年学术年会论文集 纯化的党参多糖，用硝酸一亚硒酸钠法进行硒化修饰，以亚硒酸钠用量、反应温度和反应时间三因 素、三水平正交设计9种修饰条件，得到9种硒化党参多糖sCPPsl～sCPPS9。体外试验，根据安 u 5个浓度。免 全浓度的测定结果分别用R／MINll640培养液依次倍比稀释成1．563～0．098g／mL 疫试验，分别用蒸馏水稀释成1mg／mL，常规消毒备用。 1。2主要试剂与仪器 1640培养液，RPM21640培养基(Gibco公司)，按说明书用三蒸水配制，加入双抗(青、链 霉素各100IU／mL)，临用前加入10％的小牛血清(杭州四季青公司)作为细胞生长液；淋巴细胞 10923；四甲 分离液，上海恒信化学试剂有限公司产品，批号202 7．4的PBS配成5 基偶氮唑蓝(MTT，噻唑蓝)，Amresco公司产品，用pH mg／mL，0．22 um微孔滤膜过滤，4C避光保存；二甲亚砜(DMSO)，分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司 产品，批号100702。 DG一3022型酶联免疫检测仪，国营华东电子管厂产品；C02培养箱，美国Revco公司生产： xSZ—D2型倒置显微镜，重庆光学仪器厂