液相色谱在农药残留检测中的应用.ppt

色谱法的简称(又叫色层法,层析法),其本质是一种分离分析方法 ..常见的分离方法 —蒸馏 —离心 —电泳 —过滤 —超滤 ..色谱 目前最有效的分离方法 色谱图（chromatogram）--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号－时间曲线，又称色谱流出曲线（elution profile）. 基线（base line）--流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。 噪音（noise）――基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。 漂移（drift）基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。 色谱峰（peak）--组分流经检测器时相应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称性正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。不对称色谱峰有两种：前延峰（leading peak）和脱尾峰（tailing peak ） 保留时间（retention time,tR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。 死时间（t0）--不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。 调整保留时间（adjusted retention time,tR’）--扣除死时间后的保留时间。也称折合保留时间（reduced retention time）。在实验条件（温度、固定相等）一定时，tR’只决定于组分的性质，因此，tR’(或tR)可用于定性。TR’=tR-t0 保留体积（retention volume,VR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。 死体积（dead volume,V0）――由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。调整保留体积（adjusted retention volume,VR’）--扣除死体积后的保留体积。 手动进样器 自动进样器 标准进样过程原理示意图 分离系统：主要是色谱柱，由柱管和填充剂组成，柱管多用不锈钢制成。柱内填充剂有硅胶和化学键合固定相。在化学键合固定相中有十八烷基硅烷键合硅胶（又称ODS柱或C18柱）、辛烷基硅烷键合硅胶（C8柱）、氨基或氰基键合硅胶等。 ①常规分析柱(常量柱)，内径2~5mm(常用4.6mm，国内有4mm和5mm)，柱长10~30cm; ②窄径柱(narrow bore，又称细管径柱、半微柱semi-microcolumn)，内径1~2mm，柱长10~20cm; ③毛细管柱(又称微柱microcolumn)，内径0.2~0.5mm; ④半制备柱，内径5mm; ⑤实验室制备柱，内径20~40mm，柱长10~30cm; ⑥生产制备柱内径可达几十厘米。柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定，目的是为了避免管壁效应。 固相萃取技术 提取液吹干后要经过净化过程，用到的是固相萃取技术，其原理是：固相萃取主要通过目标物与吸附剂之间的以下作用力来保留/吸附的 1）疏水作用力：如C18、C8、Silica、苯基柱等 2）离子交换作用：SAX, SCX，COOH、NH2等 3）物理吸附：Florsil、 Alumina等 针对填料保留机理的不同（填料保留目标化合物或保留杂质），操作稍有不同。 1）填料保留目标化合物 固相萃取操作一般有四步： 活化---- 除去小柱内的杂质并创造一定的溶剂环境。（注意整个过程不要使小柱干涸） 上样---- 将样品用一定的溶剂溶解，转移入柱并使组分保留在柱上。（注意流速不要过快，以1ml/min为宜，最大不超过5ml/min） 淋洗---- 最大程度除去干扰物。（建议此过程结束后把小柱完全抽干） 洗脱---- 用小体积的溶剂将被测物质洗脱下来并收集。（注意流速不要过快，以1ml/min为宜） 1）填料保留杂质 固相萃取操作一般有三步： 活化--除去柱子内的杂质并创造一定的溶剂环境。（注意整个过程不要使小柱干涸） 上样--将样品转移入柱，此时大部分目标化合物会随样品基液流出，杂质被保留在柱上，故此步骤要开始收集（注意流速不要过快） 洗脱---用小体积的溶剂将组分淋洗下来并收集，合并收集液。（注意流速不要过快） 谢 谢！ Wi与Ai 分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积。(Wi ) s及(Ai )s 分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及