鼻咽癌病人血清中IgG／Zebra抗体的ELISA法检测.pdfVIP

维普资讯 f『) 7 雌 籼 病 毒 学 报 Vol10 No l 】994 年 3月 CHINESE 30URNAL oF VⅢ0L0GY March 19 94 鼻咽癌病人血清中IgG／Zebra 抗体的ELlSA法检测 J2 吖 兰 堑： CochetCharltal Joab Irene ^ (中 预防医学科学腕病毒研撕 北京 一 关键词 鼻咽癌，Epstein—Barr病毒，』gG 异胡懦 ．疙 赫， Zebra抗原 (也称 z或EB1)是 由Epstein—Barr(EB)病毒的BZLFI区编码蛋 白。EB病 ． 毒表达的Zebra 蛋 白与病 毒从潜伏期进入复制期有密切关系__～ 我们 已往 的研 究证 实 鼻咽癌与EB病毒之间存在紧密相关性，而且病人的EB病毒处于活跃状态 一复制期 】。近 来，曾毅等人用重组质粒 pMLP BZLF1转染的293细胞为Zebra抗原片，采用间接免疫荧 光法检测鼻咽癌病人血清中IgG,,Z抗体，其抗体阳性率达 85．7％ 。本文通过用纯化基因重 组Zebra抗原直接包被ELISA的聚苯乙烯板，检测鼻咽癌病人血清中 JgG 抗体，试 图提 高对鼻咽癌血清 中JgG 抗体检测的敏感性，更加有助于鼻咽癌 的早期诊断和预后判断。现 将结果报道如下 1．血清标本来源 随机收集经病理检查确定和临床治疗前后的鼻咽癌病人 7l例，其中 治疗前 的23例，治疗 1年后 的24倒 ．治疗 2年后 的 24例 健康人血清 98例 。全部血清标 本均在 一40℃保存 。 2．Zebra抗原 由重组质粒 pMLP BZLF1表逃的蛋 白。 3．ELISA法 先用 pH96碳酸盐缓冲液稀释纯化后 的Zebra蛋 白，并作 为抗原包被液， 其浓度为 l#gm／l 按每孔 100#1包被 96孔聚苯 乙烯 板，4℃ 过夜。洗涤 后，加 2％BSA， pH7．6，001mol皿 PBS液 ，150#1／孔，37℃ 温育 1．5小时进行封 闭 然后，加 被 检血 清 (1： 20)lx【1l舟t，37℃温育 1．5小时。同时以正常人 (IgG／z抗体阴性) 血清 作对 比和设稀 释液 (PBS—T20)作空 白对照。待抗原一抗体结合反应后，洗涤 3次，加人辣根过氧化物 酶 (HRPO)标记的羊抗人 JgG结合物 (购 自北京生物制 品研究所)，100#1／孔 ，37℃温育 l 小 时 以上各操作之 后均用 pH7．6、0．叭mol／L含 0．05％Tween一20的 PBs洗 涤，每次 5分 钟，共 3次 最后加人 100ul／孔邻苯二胺底物液，室温显色 10分钟。以6N HC1终止反 应 酶联分光光度计读取490nm 的OD值，P 比值 2．1者为阳性。 通过棋盘稀释度选择试验，当被检血标本稀释 度为 1：20，酶结台物稀释度为 1：1000时， 其P／N 比值最大 (见图 1)。采用此稀释度对血清中IgGZ／抗体的检测结果显示，作为对照 的98例健康人血清中，除 3例P?N 比值 2．1(ezbra抗原的McAb能阻断其 阳性反应 )外， 其余均为阴性 71例鼻咽癌病人中，治疗前 的病人其 JgG 抗 体阳性率为 100％，治疗 1年 后病人的阳性率为 54％：治疗 2年后 的为 63％(见表 l 从表 中数据还可 以看 出，治疗前病 吉林医学院，吉林市 t32001 ” Institute