NGX6基因对高转移鼻咽癌细胞株5-8F细胞的影响.pdfVIP

．618． 生物化学与生物物理进展Pm昏Biochem．Biophys． NGX6基因对高转移鼻咽癌 细胞株5．8F细胞的影响术 王莉莉”， 张秋红-’马健-，彭聪-)曹利·’唐珂1)李小玲。李桂源D¨ (1)中南大学湘雅医学院肿瘤研究所，长沙410078；∞中南大学基础医学院微生物学教研室，长沙410078) 摘要NGx6是一个新克隆的鼻咽癌候选抑瘤基因．为进一步研究其功能，在构建NGx6的真核表达载体 长曲线、软琼脂集落形成实验对转染细胞的生物学行为进行了检测，同时采用包含1176个与肿瘤学相关的基因 的生长速度明显减慢，在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降(P0．05)，发现NGx6基因的转染能够上调 5．8F细胞中p19、catenin仅2、desmo西ein 上所述，NGx6基因可以抑制5-8F细胞的恶性生物学行为，并影响一些与细胞周期、细胞黏附和血管生成有关的 基因的表达．上述结果为鼻咽癌转移分子机制的阐明提供了重要的线索． 关键词NGX6基因，鼻咽癌，肿瘤转移，cDNA微阵列 学科分类号R73 鼻咽癌(nasopharyIlgealcarcinoma，NPC)是好 发于东南亚及我国南方各省区的恶性肿瘤【”，其病 Su旺．1亚细胞株5．8F进行了异质性研究证实： 因涉及EB病毒感染、化学致癌物作用及多种癌基 5—8F为具有高成瘤、高转移潜能细胞株．本研究分 因与抑癌基因结构和功能的改变．鼻咽癌临床病理 析NGx6基因转染对5．8F细胞生物学行为的影响， 特点为低度分化和高转移性，以颈部淋巴结转移为 首发症状就诊的病例可高达78．9％，而转移的发生 5．8F细胞基因表达谱的影响，为我们阐明鼻咽癌 预示着预后不良，故鼻咽癌转移机制的阐明及防治 转移的机制提供了重要的依据． 有重要意义．我室从9p区域采用EsT介导的定位 1材料与方法 候选克隆方法克隆了与鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选 1．1材料 基因NGX6[2】，GenBaIlk登录号为AFl88239．对该 基因初步的功能研究显示，NGx6在鼻咽癌活检组 织、鼻咽癌上皮细胞株(m咂1)中表达下调甚至缺清购自中国华美生物工程有限公司，脂质体购自 失f25例活检样本中，12例表达下调，下调比例为 50％～80％，9例表达缺失，m姬1细胞中表达缺 失1，而在正常鼻咽组织和原代培养的鼻咽上皮细 移特性，是鼻咽癌细胞株u咂1细胞的亚型，为中 胞中存在明确的表达．已有研究采用RT．PCR、山医科大学肿瘤所建系M．RNA酶为美国 GⅢC0啪RL公司产品．随机引物标记盒、逆转录 RNA印迹momlemblot)方法分析了NGx6在结肠 癌组织中的表达，令人感兴趣的是发现NGX6表 达与结肠癌的转移呈负相关【3]． cDNA微阵列是系统、全面探索基因组功能的 新方法，具有高通量的特点，可同时比较不同标本 的基因表达差异．SuNE．1是鼻咽癌组织来源的··通讯联系人． EBv阳性细胞株，为典型低分化鳞癌细胞．从Tel：0731—4805383，E—mail：ligy@xysm．net 收稿日期：2005—01—17，接受日期：2005一02．28 万方数据 2005；32(7) 生物化学与生物物理进展 Pmg．Bioch哪．Bi叩hys． ．619． 公司，TRIZOLlM试剂购自美国C讧BCOL倍RL公司． DNA分子质量标准购自大连宝生物工程有限公司． 对照5．8F细胞各1×l舻个／孔接种于24孔板内， 蛋白酶抑制剂购自Roche公司，BCA蛋白测定试每隔24h消化细胞计数，每次每种细胞计数3孔， Chemical 剂，化学发光试剂均购自Piecre Co． 取均值．共检测7天，以细胞数为纵坐标，间隔时 catenin仪2、desmogleinl