HIV-1逆转录酶抑制剂筛选方法的研究.pdfVIP

摘要 摘要 逆转录酶在人类免疫缺陷病毒(HIV)的生命周期中发挥着至关重要的 作用，成为目前最成功的获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的治疗靶点之一， 逆转录酶抑制剂在AIDS治疗中必不可少。现有药物的副作用和耐药性的快 速出现使得寻找新H1V逆转录酶抑制剂的研究工作更为紧迫。天然产物是新 药的重要来源，如能刺天然产物籼提物进行HIV逆转录酶抑制活性筛选将极 大地提高发现新HIV逆转录酶抑制荆的效率。因此，本文以发展可用于天然 产物粗提物的HIV逆转录酶抑制剂的筛选方法为目标进行r研究。 首先，创新性地将异相免疫分析、时间分判}荧光检测与HIV-1逆转录酶 催化的逆转录反应相结合，构建了新的HIV-l逆转录酶活性检测方法。这一 粗提物中内源性生物素带来的干扰；检洲中使用的异相时间分辨荧光技术可 以有效避免天然产物粗提物自身对检测准确性带来的干扰。实验证实了其i0‘ 行性。 其次，对一些重要的影响冈素进行优化，并对优化后的方法进行了l平价。 研究表明，新力法简便、快速，可以准确定量检测HIV一1逆转录酶活性，灵 敏度高，重复性好，证实所开发的方法能确效避免天然产物粗提物中内源性 生物素带来的干扰，准确检测纯物质和天然产物粗提物的HIV-l逆转录酶抑 制活性，而且可用』’分离提取时的活性跟踪。 最后，将该方法用于海绵天然产物的研究。结果表明，该方法可以评估 海洋生物粗提物的HIV一1逆转录酶抑制活性，可以用于分离前后的活性跟踪， 并进而指导下一步的分离。 关键词：HIV，逆转录酶，抑制剂，筛选，时间分辨芡光 Abstract Hu(BiochemicalEngineering) Zheng ProfMaicunandWei Supervisedby Deng Zhang rolein Reverse avital the ofthelife transcriptase(RT)playsearlypart cycle hasbeen ofhuman oneofthemostsuccessful virus(HW)．RT immunodeficiency for over20 targetsacquiredimmunndeficiencysyndrome(AIDS)therapyyears． InhibitorsofHIVRTare tothe activeantiretroviral indispensablehighly therapy AIDSThesideeffectsand resistancesthe (HAART)of drug of existingdrugs fornew an researchon inhibitorsofHIVRT．Natural urgent searching prompt are sourcesofnew discovernewHIVRT productsimportant drugs．Toefficie