HLAI类分子在肝癌中表达异常的分子机制研究.pdfVIP

中文摘要 肝癌中HLAI类分子异常表达的分子机制研究 [中文摘要] 研究生：沈宇清 导师：单祥年教授谢维教授张建琼教授 东南大学发育与疾病相关基因教育部重点实验室 肿瘤细胞表达HLAI类分子是激发肿瘤抗原特异性CTL细胞进行肿瘤免疫治疗的关键．已有研究 I类分 发现肿瘤细胞中存在不同程度和各种类型的HLA分子表达下调．在～些类型的肿瘤中这种HI．,A 子的下调或丢失甚至可接近100％，是肿瘤细胞逃避宿主免疫监视的重要机制。肝癌在我国发病率高， 临床病程短，病人预后极差。本研究探讨肝癌组织标本中HLAI类及相关分子的表达情况以及肝癌细胞 株中HLAJ类及相关分子表达异常的分子机制，为临床开展肿瘤免疫治疗提供实验依据。 首先应用5种HLA相关分子单抗，采用免疫组化的方法检测肝癌组织标本中HLAI类分子的表达， 统计分析各分子表达之间的关联性及其与临床病理分级的相关性；再分别以HLAI类分子表达上调和下 调肝癌细胞系为对象，进一步深入研究其异常表达的分子机制。研究结果表明： l、采用第十三届国际主要组织相容性会议所制定的标准，以肝癌高发的江苏启东地区为研究现场，针 对大规模临床样本，检测其HLAI类及相关分子的表达情况．免疫组化染色结果显示在165例肝癌 组织石蜡切片中，除了LMP2分子之外．HLAI类各分子均有不同程度的上调．其中以HLAI类分 子A位点上调最明显(54％)。此外，还发现肝癌中存在HLAI类各分子表达一致，在多例组织中存 在HLAI类各分子的同时上调。提示在肝癌中有可能存在某一种上游分子诱导所有HLAI类相关分 子同时表达增加。本实验室还运用免疫组化，半定量RT-PCR和WesternBlot技术检测30余例肝癌 新鲜组织标本HLAI类分子的表达情况也得到同样的结果，充分肯定了肝癌中存在有与其他肿瘤 HLA I类分子表达下调不一致的情况。 I类复合物表达的研究，发 Q05和正常人肝细胞系I．,-02以及癌旁肝细胞系QSG7701细胞表面HLA 现与免疫组化结果一致，肝癌中存在着HLAI类分子表达上调和下调的细胞系。荧光定量PCR技术 检测所有细胞系中参与HI．,AI类抗原加工递呈过程分子的表达，在HI．,AI类分子表达上调的细胞系 明显。在HLAI类分子表达下调的细胞系BEL7404中．HLA重链、轻链及TAP分子均表达正常， 存在蛋白酶体复合物亚单位LMP2表达减少，LMF／表达缺失．在初步了解导致表面HLAI类复合 物表达改变因素的基础上，我们集中研究具有代表性的细胞系，运用更多的方法来肯定这些因素的 存在并深入分析其具体的分子机制。 3、选用相对低表达HLA I BELT402为研究对象。研究发现HLA．A重链分子在转录水平的增加是引起这两株肝癌细胞系HLA 类分子表达上调的关键因素，其它抗原加工递呈分子改变不明显。进一步研究发现在这两株肝癌细 胞系中，结合ISRE顺式作用序列的转录因子IRF-I增加是介导HLA—A重链表达增加的重要因素， 发现IRF-1分子的增加，提示这一分子在调节肝癌HLAl类分子表达中起重要作用。但这一因子活 化的信号刺激来源以及与HBV感染的相关性还需要进一步研究。 4、在对一株低表达HLA HLA I类分子表达下调的主要原因，通过过表达外源性LMP2分子能部分恢复表面HLAI类分子的 表达。尽管只转入外源性LMP／分子不能恢复细胞表面HLAI类复合物的表达，但经IFN．Y处理后 BEL7404几MP7细胞HLA 胞。这说明LMP7分子与LMP2分子具有协同作用，LMP分子的改变影响到肝癌细胞表面HLAI类 分子的表达。 以上研究结果提示在我国原发性肝癌中，存在着HLAI类分子的多种表达异常。其中HLAI类分子 在肿瘤中的表达上调比率较高．是一种不同于其它肿瘤细胞