p27、CyclinE和PCNA在上皮性卵巢肿瘤中的表达及临床意义.pdf

中 文 摘 要 p27,CyclinE和PCNA在上皮性卵巢肿瘤 中的表达及临床意义 摘 要 目的:卵巢肿瘤是女性生殖系统的常见肿瘤，且卵巢恶 性肿瘤亦是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，但至今对其 缺乏有效的诊断方法，使得卵巢恶性肿瘤患者五年存活率 一直处于较低的水平，徘徊在 25-30%。目前随着宫颈癌和 子宫内膜癌诊断技术的进步和治疗效果的提高，卵巢癌已 成为严重威胁妇女生命的主要肿瘤之一。卵巢癌之所以难 以防治，与其发生发展机制不太明确有很大关系，所以探 讨卵巢癌的发生发展情况对于其诊断、治疗及预后均至关 重要。细胞周期调控问题是当前肿瘤学研究的热点，其分 子机制依赖于细胞周期素、细胞周期素依赖性激酶和细胞 周期素依赖性激酶抑制剂三者的相互作用，它们在细胞周 期的发展中起了一个根本性的作用。目前认为p27和 CyclinE在卵巢癌的发生发展过程中起着重要作用。PCNA (增殖细胞核抗原)是目前研究最透彻的肿瘤细胞增殖标 记物之一，其表达显示出与增殖细胞存在直接相互关联。 目前在细胞周期调控机制中，p27和CyclinE表达的研究己 经成为研究上皮性卵巢癌发生发展的热点蛋白。 本研究应用间接免疫荧光流式细胞技术和免疫组织化 学方法共同检测解7.CyclinE和PCNA在良性、交界性 和恶性上皮性卵巢肿瘤组织中的表达情况，分析它们在上 皮性卵巢肿瘤中的表达和与上皮性卵巢癌的临床分期、分 中 文 摘 要 化程度和病理类型的关系;并且应用免疫组化技术进一步 分析p27,CyclinE和PCNA的蛋白表达在上皮性卵巢肿瘤 组织中的细胞和亚细胞定位。旨在通过研究p27,CyclinE 和 PCNA在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达，来进一步探讨 它们在上皮性卵巢肿瘤发生发展中的作用及其相互关系， 并为上皮性卵巢肿瘤的治疗监测和预后评估提供理论依 据。 方法:1研究对象:选取2002年 1月一2003年 10月我 院上皮性卵巢癌住院患者64例，年龄34-70岁，平均年龄 58.4岁。其中良性 10例，交界性 12例，恶性42例 (猫 液性 15例，浆液性 14例，宫内膜样 13例)。按照 1987 年FIGO临床病理分期标准进行分期，其中I期7例，II期 10例，III期23例，N期2例。取正常卵巢组织 10例作对 照，年龄在29-54之间，平均年龄 40岁。2方法:应用间 接免疫荧光流式细胞技术及免疫组化的方法。 (1) 将固 定的卵巢肿瘤组织或正常卵巢组织制成单细胞悬液，并调 整细胞数为 1X106/ml。取单细胞悬液 0.1m]，分别加入 0.1ml浓度为 1:100浓度稀释的鼠抗人p27蛋白单克隆抗 体、1:100浓度稀释的鼠抗人细胞周期素 E单克隆抗体和 1:100浓度稀释的小鼠抗大鼠增殖细胞核抗原单克隆抗体，混 匀，置于37℃水浴箱中孵育30分钟。加入浓度为O.Olm 的 PBS缓冲液lOml混匀，离心1000转/分钟，时间5分钟，洗 涤离心两次，弃上清。加入O.Olm 1:100浓度稀释的羊抗鼠 FITO-IgG抗体进行免疫荧光染色，37℃水浴箱中孵育30分 钟。再用0.01M的PBS缓冲液lOml洗涤离心两次，弃上清， 以除去未结合的多余荧光抗体，上机检测前加入lmlPBS缓 中 文 摘 要 冲液中混匀，经 500目筛网过滤至样品管中，上机检测。 (2)术中切取的卵巢组织于4%的中性缓冲福尔马林液中 固定，然后制成蜡块，常规病理切片，14E染色。由有经验 的病理医师进行诊断核实，并进行S一免疫组化染色。 结果:1p27,CyclinE和PCNA在上皮性卵巢肿瘤组织 中的表达:p27在卵巢癌组织中呈低表达 (38.9%)，在卵 巢良性 (80%)或交界性肿瘤 (75%)中呈高表达;在卵巢 癌组织中的Fl值 (0.876士0.063)低于良性 (0.978士 0.009)或交界性 (0.967士0.038)卵巢肿瘤组织，P0.01。 CyclinE在卵巢癌组织中呈高表达 (76.2%)，在 良性 (41.7%)或交界性 (30%)肿瘤中低表达;在卵巢癌组织 中的Fl值 (1.3