荧光原位杂交免疫组织化学对乳腺癌HER-2基因检测研究.pdfVIP

高免疫活性粒细胞对肺鳞癌杀伤效应的病理学研究 吕亚莉王琼邰燕红钟梅董周寰 (解放军总医院病理科) 【摘要】目的t免疫细胞与肿瘤细胞之间的相互作用关系，一直是肿瘤免疫治疗领域研究的热点问题， 而中性粒细胞作为机体免疫最前沿的效应细胞，其对肿瘤细胞的杀伤作用，近年来逐渐引起学者的密切关 注，并作出很多较为肯定的结果，但是，中性粒细胞杀伤肿瘤细胞的作用主要在细胞系及实验动物模型中 进行，对于人体肿瘤的杀伤作用还不清楚。本课题探讨中性粒细胞对人体肺鳞状细胞癌的杀伤效应；方法。 例，HE染色观察中性粒细胞的分布与肿瘤组织临床病理学指标的相关性，并寻找中性粒细胞杀伤肿瘤细 胞的直接形态学证据。用免疫组化方法检测癌组织中粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的表达水平，探讨中 志愿者的全血中分离中性粒细胞，与肿瘤患者血中分离的中性粒细胞进行肺鳞癌细胞系的细胞杀伤实验， 将中性粒细胞杀伤肿瘤细胞的效应大于50％定义为高免疫活性的中性粒细胞。原代培养人肺鳞癌细胞，加 入高免疫活性中性粒细胞，MTr法检测中性粒细胞对人肺鳞状细胞癌细胞系的体外杀伤效应。结果：HE 染色的组织切片可见中性粒细胞作用下肿瘤细胞的凋亡现象。300例肺鳞癌组织中，可见中性粒细胞呈不 同程度地分布于肿瘤组织内，其数量与肿瘤组织的恶性程度呈显著性正相关(p0．01)。肺鳞癌组织中G℃SF 的表达水平与中性粒细胞的表达水平呈显著性正相关(p0．01)，并与肿瘤组织的恶性程度呈显著性正相关 (po．05)。中性粒细胞能在体外培养的肺鳞癌细胞周围排列成花环样，并能对培养细胞进行直接杀伤作用。 与对照组相比，加入中性粒细胞的肺鳞癌细胞存活率明显下降(p0．01)。结论：中性粒细胞在肺鳞癌组织 中随肿瘤恶性程度的增加而增多，且与G-CSF的表达呈正相关，提示中性粒细胞可能是肿瘤细胞分泌的 G．CSF对循环中性粒细胞的趋化作用的结果。中性粒细胞能够有效杀伤人体肿瘤细胞，提示中性粒细胞的 免疫机制是机体肿瘤免疫的一个重要方面。中性粒细胞对体外培养肺鳞癌细胞的杀伤效应，为体内中性粒 细胞介导的肿瘤免疫提供了直接的形态学及杀伤效应的证据。 【关键词】颗粒细胞集落刺激因子(G-CSF))肺鳞癌；免疫组化；细胞培养 荧光原位杂交与免疫组织化学对乳腺癌 HER一2基因检测的研究 罗建湘1 刘载道2冯雪萍2 (1长沙市三医院，2湘雅医院) 和基因扩增检测结果存在一定的差异性，建议II-IC(忡卅)患者进一步作FISH检测以确诊。 【关键词】荧光原位杂交；免疫组化；乳腺癌；HER，2／癌基因 原癌基因HER．2是人类表达生长因子受体家族的第二个成员，编码具有氨酸激酶活性的跨膜蛋白，是 细胞增殖分化、移动和存活的重要调节因子①。目前，乳腺癌中有25％．30％的病人有HER．2基因扩增。 其过度表达与乳腺癌病程的进展和不良预后有关②。因此，检测HER．2的表达情况对于判断预后具有重要 意义，同时也是乳腺癌患者靶向治疗药物．赫塞丁使用的唯一指标。 扩增状态，比较两种的不同，评价FISH在检测HER-2基因扩增中的作用。 l材料与方法 1．1材料 均48岁。经病理诊断为浸润性导管癌，病理组织学分级I级4例，Ⅱ级19例，m级15例。标本均采用 10％福尔马林固定、石蜡包埋，组织切片厚度为5um。 1．2试剂 1．2．1珥【c检测试剂 7 长嘉生物有限公司。 1．2．2 FISH检测试剂 HER-2 Pathvysion 的产品。 1．3方法 1．3．1免疫组化Envision二步法 主要操作步骤：常规石蜡切片脱蜡、水化，微波进行抗原修复；PBS洗涤充分；滴加一抗于室温孵育 苏木素衬染、脱水、透明、封片。每个标本均设阳性和阴性对照。 1．3．2 FISH法 盐酸，常温20min，2xSSC洗；lmol／LNASCN 洗去多余的探针，DAPI复染，盖盖玻片。荧光显微镜观察结果。 1．4结果判定 1．4．1IHC的结果判定光镜下观察以细胞膜呈棕褐色为阳性。(．)：完全没有着色或少于10％肿瘤细胞有 弱至中度完整的细胞膜着色；(¨+)：大于10％的肿瘤细胞呈现强的、完整的细胞膜着色。结果判定以(十H) 染色为阳性，其余染色为