ISSRs在杜仲遗传多样性研究及性别鉴定中的应用分析.pdf

摘要 杜仲 (EucommiaulmoidesOliv.) 是我国名贵的药用植物，本论文包含两部分主要 内容： （1）杜仲ISSR-PCR 反应体系的建立与引物筛选及其在遗传多样性研究中的 2 ISSR 应用；（）基于 分子标记的杜仲雌雄性别鉴定。 通过正交试验建立了适合杜仲的 ISSR-PCR 反应体系，即总体积为20.0 µL： -1 -1 -1 DNA(5-10ng·µL )2.0 µL dNTP(10mmol·L ) 0.25 µL (10 µmol·L ) 0.7 µL ， ， 引物 ， 2+ -1 -1 Mg (25mmol·L ) 2.4 µL， TaqDNA 聚合酶 (5U·µL ) 0.2 µL，10×PCR 缓冲液2.8 µL，HPLC 水11.65µL；同时筛选出了14条多态性较高的有效引物；初步分析了杜 108 n 1.505 仲的遗传多样性， 共扩增出 个多态性位点，有效等位基因数 为 ， e Nei’s 期望杂合度 H 为 0.308，Shannon 多态性信息指数 I 为0.472。 研究结果初 e 步揭示了杜仲具有较高的遗传多样性， 表明 ISSR 标记技术适用于杜仲的遗传多样 性研究，为杜仲多居群的遗传多样性研究奠定了理论和技术基础。 以杜仲雌雄植株为材料，根据已建立的反应体系和扩增程序，对杜仲雌雄植株进 行了性别鉴定。结果表明， 利用引物 UBC858 扩增出一条大小为3000bp 的雌性特 异性条带，且这条特异带在雄性植株中没有出现， 说明 ISSR 分子标记可用于杜仲 雌雄性别的的早期鉴定。研究结果为杜仲种质资源在幼苗时期的合理配置，现有杜仲 种质资源的保护、交流、永续利用，以及在此基础上的分子育种提供可靠的、准确的 理论依据和实践指导。 关键词：杜仲，ISSRs，PCR 反应体系，遗传多样性，性别鉴定. I Abstract Eucommia ulmoides Oliv. is a valuable medicinal woody plant endemic to China. The thesis is composed of two parts: (1) establishment of ISSR-PCR reaction system, primers screening and their applications to analysis of genetic diversity for E. ulmoides; (2) Sex identificationofE.ulmoidesbased onISSRs. Inter-simple sequence repeat-polymerase chain reaction (ISSR-PCR) system was established through orthogonal test forE. ulmoides.The total reaction volume is 20.0 µL, -1 -1 -1 containing DNA(5-10ng·µL ) 2.0 µL, dNTP(10mmol·