大肠埃希O157_H7等致病菌多重PCR法快速检测试剂盒的研制.pdfVIP

第11卷第3期 中国食品学报 V01．1lNo．3 201 of of Scienceand 1 1 1年6月 JournalChineseInstituteFood TecIlIlo】0科 Jun．20 大肠埃希0157：H7等致病菌多重PCR法快速检测试剂盒的研制 王文娟1赵宏坤l’鲈 (1山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 2青岛农业大学食品科学与工程学院 山东省肉类食品质量安全工程技术研究中心 山东青岛及衢109) 摘要 目的：研制一种能够同时快速检测大肠埃希0157：H7、志贺氏茵和致病性蜡样芽孢杆菌的三重PCR试 剂盒。方法：以大肠埃希0157：H7的htyA曰基因、痢疾志贺氏茵的如讲基因和致病性蜡样芽孢杆菌的拍M 基因作为目的基因片段0157：H7、痢疾志贺氏茵和致病性蜡样芽孢杆菌的特异性抗原基因序列．分别设计1对 引物，并对其反应条件进行优化，建立1种多重PCR检测试剂盒。结果：本试剂盒可准确检测出生肉和即食肉 制品中的上述3种致病菌，0157：H7检出极限为19．8cfu／mL，志贺氏茵检出极限为17cfu／mL．蜡样芽孢杆菌检 出极限为17．7cfu／mL。可在5 h内完成全部反应过程，得出检测结果。结论：本试剂盒在理论和实际应用方面 均具有优越性，能够同时检测上述3种病原茼，可用于食品及其原料的生物安全检测，也可用于兽医临床诊断。 关键词 多重PCR；食品检测；大肠埃希0157：H7；志贺氏茵；致病性蜡样芽孢杆茵沙门氏茵 文章编号 1009—7848(2011)03—0144-08 大肠埃希0157：H7为近年报道的食源性强致病性蜡样芽孢杆菌3种食源性致病菌的PCR方 病菌，其轻度感染者会出现短暂腹泻、恶心、呕吐 法，研制快速检测试剂盒，为监测食品及其原料的 等症状，重者导致剧烈腹痛、出血性结肠炎、溶血 生物安全，减少食源性感染和食物中毒以及兽医 性贫血、血小板减少性紫癜和溶血性尿毒综合症。 临床快速诊断提供技术手段。 甚至死亡【1】。鸡肉和牛肉被认为是传播0157：H7 主要的载体tzl。志贺氏菌是一类具有高度传染性且 1材料与方法 危害严重的革兰阴性肠道致病菌．是导致感染性 1．1 材料 腹泻的主要病原菌之一，全球每年约有1．6亿人 1．1．1 coli 菌株大肠埃希(Escherichia0157： 患病，110万人死亡，绝大多数为5岁以下儿童[31。 致病性蜡样芽孢杆菌极易污染食物而引起食物中 cereus 毒，特别是在蛋白质和碳水化合物含量丰富的食 ATCCll778)，购于青岛海博公司；金黄色葡萄球 品，如肉类、米饭等中，通常引起腹泻综合征和呕 ATCC 菌(Sta．aureus25923)、单细胞增生性李斯 吐综合征。由于其在临床上与产肠毒素的葡萄球 特菌(Listeria CVCC monocytogenes1597)、沙门 菌，产气夹膜梭菌感染有相似的症状，所以常常造 CVCC 氏菌标准株(Salmonella spp 542)、肠炎沙 成误诊[41。目前这些致病菌污染问题已