利用狭鳕加工废料制备胶原的表征及其生物学功能.pdfVIP

刘 寒等：利用狭鳕加工废料制备胶原的表征及其生物学功能 利用狭鳕加工废料制备胶原的表征及其生物学功能‘ 刘 寒1，刘成圣1，陈 军2，李相宜1，范 冰1，陈丽媛1，陈西广1 (1．中国海洋大学海洋生命学院，山东青岛266003； 2．青岛商业职工医院外科部，山东青岛266011) 摘 要： 以狭鳕加工废料为来源提取酸溶胶原并加 30min收集沉淀。收集的白色沉淀再次盐析提纯。最 以表征。该胶原在230nm处有最大紫外吸收，红外吸后将产品透析72h并真空冻干。 收光谱指示存在螺旋结构。电泳图谱分离出多个亚 2．2样品性能及表征 基，鉴定为I型胶原。该胶原有独特的氨基酸组成，甘 2．2．1紫外光谱分析 氨酸迭19．8％，羟脯氨酸占6．9％。酸水解制备的胶 原多肽平均分子量区间为3．2～53kDa。胶原多肽具 有不同的生物学功能：较高分子量的胶原多肽用于小 光光度计在190～400nm波长范围内扫描。 鼠表现出止血、促凝血和促进外伤愈合的功能，而较低 2．2．2红外光谱分析 分子量的胶原多肽则对烫伤修复有显著的促进作用。 胶原样品与KBr压片后，用Nicolet380傅立叶一 关键词：狭鳕；胶原多肽；表征；分子量；生物学功能 中图分类号：Q51／57 文献标识码：A 结果用美国热电公司Omnic7．3软件分析处理。 2．2．3 文章编号：1001—9731(2011)05-0959-04 1 引 言 并与样品缓冲液(0．5mol／L 胶原作为脊椎动物中最丰富的结构蛋白，迄今已 Protein- 有超过20种被鉴定出来，其中I型胶原是存在于鱼皮 浓缩胶和分离胶浓度为5％和8％，使用Mini 中最多的一类胶原蛋白[1]。由于陆生动物多发疫病， 定。电泳结束用考马斯亮蓝染色后脱色至背景透 原料一直是胶原提取的首要问题，而狭鳕(theragra 明‘“。 chalcogramma)作为重要商业鱼种全球年产量130万 吨以上。目莳国内狭鳕加工企业主要生产去皮速冻产 2．2．4氨基酸组成分析 品，加工过程产生大量以鱼皮为主的废料，如用于胶原 胶原样品与6mol／LHCl混匀后用安瓿瓶充氮密 的提取，能获得更大的经济效益。水解能够使得蛋白 封，在130℃下水解3h，水解液经脱酸处理后用安捷伦 质产生新特性，利用不同材料制备活性多肽一直是近 HPll00氨基酸自动分析仪测定氨基酸组成。 年研究的热点口’3]。胶原水解多肽具有营养丰富、抗 2．3胶原多肽制备 原性低、功能多样的特点，因此常被用作各种食品添加 2．3．1胶原水解 剂和辅料。本工作拟从狭鳕的加工废料中提取胶原并 加以表征，此外制备和考察水解胶原多肽在小鼠的止 血、凝血、外伤愈合以及烫伤修复中的生物学作用，为 胶原多肽的生物学功能的研究提供依据。 液将反应体系调整为中性以中止反应。 2．3．2水解胶原多肽的分子量 2 实 验 水解后的胶原多肽与缓冲液混合进行SDS 2．1胶原提取 电泳，电泳后凝胶用考马斯亮蓝染色并生成图像，再用 4．0软件(美国Media 原料经蒸馏水洗涤后剪碎，0．1mol／LNa0H浸泡Gel—proAnalyzer Cybernetics 2h去除杂蛋白，再用1