1890型PCR荧光分析仪课件.ppt

1890型PCR荧光分析仪 介绍及应用 实时荧光定量PCR的应用 临床方面的应用 ? 疾病的临床早期诊断 ? 建立病原体病分子诊断标准 ? 疗效考评 ? 指导制订感染性疾病合理治疗方案 ? 了解感染性疾病病人用药后病情的变化情况 ? 医院、血站及防疫站的确诊 ? 新药研究中药物的作用效果 ? 研究Elisa方法的漏检率 ? 病毒性疾病中病毒的耐药性变异株的测定，为疾病治疗进行指导 遗传病诊断中的应用 ? 等位基因检测 ? 多基因遗传病的突变检测 ? 基因表达异常所致遗传病检测 在肿瘤诊断中的应用 ? 肿瘤相关基因表达的检测 ? 肿瘤标志物（肽类激素和酶） ? 肿瘤耐药基因（MDR） 何谓PCR ? 试剂的定量原理： Taqman水解探针定量 Roche杂交探针定量 分子信标定量 SYBR Green Ⅰ染料定量 PCR的发展史 PCR原理和方法: (一) PCR原理和方法: (二) 影响PCR特异性的因素 退火步骤的严格性：提高退火温度可以减少不匹配的杂交，从而提高特异性。 减短退火时间及延伸时间可以减少错误引发及错误延伸。 引物二聚体是最常见的副产品，降低引物及酶的浓度也可以减少错误引发，尤其是引物的二聚化。 改变MgCl2(有时KCl)浓度可以改进特异性，这可能是提高反应严格性或者对Taq酶的直接作用。 模板中如果存在次级结构，例如待扩增的片段易自行形成发夹结构时，可在PCR混合物中的4×dNTPs中加入7-脱氮-2’-脱氧鸟苷-5’-三磷酸（7-deaza-2’-deoxyguanosine-5’-trihosphate）(de7GTP)。用de7GTP与dGTP比例为3：1的混合物（150μmol/l de7GTP +50μmol/L dGTP）代替200μmol/l dGTP，则可阻非特异性产物的生成。 扩增反应可以无穷进行下去吗？ 答：不可以。因为经过一定的循环周期后需扩增的片段不再按指数增多而逐渐进 入平坡，进入平坡的循环次数，取决于起始时存在的模板拷贝数以及合成的DNA总量。 所谓平坡就是批PCR循环的后期，合成产物达0.3～1pmol时，由于产物的堆积，使原 来以指数增加的速率变成平坦的曲线。 造成PCR进入平坡的原因有： ? 引物和dNTP等消耗完毕 ? Taq酶失活 ? 底物过剩 ? 非特异性扩增产物的竞争 ? 退火时产物的单链自己缔合 ? 变性在高浓度产物条件下，产物解链不完全，以及最终产物的阻化作用 　（焦磷酸化，双链DNA）。 实时荧光定量PCR 的Ct值 仪器的Ct值定量原理 1890型PCR荧光分析仪的特点 高速的加热降温循环系统 采用长寿命的LED激发光源 可对PCR扩增全过程进行实时动态监测 无需开启PCR反应管，可避免在PCR期间及PCR之后产物污染，确保结果准确 可用三种不同报告染料同时用于一个样品，在单一反应中取得更多信息 全中文界面，灵活的程序设定、全面的分析和报告功能，全部参数可储存 可打印多个或单个样本报告 仪器主要技术规格 样本数： 32 反应管（光学玻璃管）长： 35mm 容积（反应体积） 10-20ul 温度范围： 40℃-98℃ 温度控制： 1℃/S-10℃/S 激发光波长： 470nm（LED） 发射光波长： 530，640，710nm 检测灵敏度： 可在一个基因组中检测单拷贝 软件操作系统： Win2000 输入电源/功率： AC220V 50HZ/800VA 仪器工作原理 （一） 仪器工作原理 （二） 强大的软件功能 参数设置功能（包括温度、时间、循环数、 升降温速率、检测通道选择） 样本资料记录功能 文件运行显示功能（PCR热循环数据显示、荧 　　光检测数据显示） 检测数据分析功能 分析结果输出功能 故障保护和报警功能 先进的光路系统 选用长寿命LED激发,无需预热，无需校正 采用了先进的非球面镜设计，提升了仪器的光学性能，缩短了光程，使仪器更小巧 优质的滤光片，硬膜镀膜技术，窄带低背景高透过率不霉变 实时三色荧光检测，尽善尽美 传统96孔板和离心毛细管比较 优异的灵敏度 宽广的线性动力学范围 友好方便的操作界面 方便的样品编辑界面 方便的温度循环设置界面 一目了然的运行界面 方便的数据处理界面 个人信