蝉花总多糖的提取纯化及含量测定.pdfVIP

JIANGXIJOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE 蝉花总多糖的提取纯化及含量测定 ★ 周俐斐 芦柏震 蔡菊芬 (浙江省肿瘤医院 杭州 310022) 摘要：目的：探索蝉花总多糖的提取纯化及含量测定方法，为深入研究蝉花总多糖提供技术方法。方法：采用水提醇沉法提取 水溶性粗多糖，经 Sevag法除蛋 白、透析和活性炭脱色制备得蝉花总多糖，采用苯酚硫酸法测定多糖含量，干燥失重法测定水 分含量。结果：经纯化后的蝉花总多糖含量为51．6％，水分含量为8．7％，在250～280nm间无明显吸收峰。结论：该系列纯 化方法能有效地去除核酸、蛋白质、小分子物质等杂质成分，使蝉花总多糖含量达到50％以上；苯酚硫酸法测定蝉花总多糖含 量简便、准确、重现性好。 关键词：蝉花；多糖；纯化；含量测定；Sevag法；透析；苯酚硫酸法 中图分类号：R284．2 文献标识码：B 蝉花为麦角菌科真菌大蝉草(Cordycepscicadae 2．2 蝉花多糖的纯化 蝉花粗多糖以水溶解后，加 Shing)及其寄主山蝉 (CicadaflammataDist)幼虫的 等体积Sevag试剂 (三氯甲烷：正丁醇=4：1)搅匀后 干燥体，其性味甘寒，具散风热、定惊镇痉的功效。 分层，分取水层透析 (截留分子量8000—12000) 、 研究表明主要含多糖、氨基酸、核苷类等多种物质， 后，浓缩成约 lmg／ml的浓度，加入活性碳使其浓度 具有调节免疫、调节脂质代谢、解热镇痛、镇静催眠 达到0．5％左右，煮沸30分钟脱色，最后经0．45 m 等多种作用 。其中多糖含量约 占2％～3％_2J，由 滤膜抽滤后，回收溶剂，冷冻干燥，即得蝉花总多糖 于蝉花中蛋白质、色素等杂质含量高，目前对于蝉花 4．85g。 多糖的研究主要集中于粗多糖或半乳甘露聚糖等单 2．3 蝉花多糖的含量测定 类糖的研究，对蝉花总多糖的研究甚少。本文对粗 2．3．1 标准曲线的绘制 精密称取葡萄糖适量，用 多糖经 Sevag法除蛋 白、透析、活性炭脱色后，经苯 蒸馏水配制成0．1mg／ml的葡萄糖标准品溶液，吸 酚硫酸法测定其总多糖含量可达50％以上。 取葡萄糖标准液0．1、0．3、0．5、0．7、0．9、1．1ml，分 1 仪器与材料 别置于具塞试管中，各加蒸馏水，使体积为2．0ml， 1．1 主要仪器 TU．1800PC紫外可见分光光度计 再加6％苯酚液 1．0ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5．0 (北京普析通用仪器有限责任公司)；LabconcoFree— ml，摇匀后放置5分钟，置沸水浴加热 15分钟，取出 Zone2．5L台式冷冻冻干机(美国Labconco公司)； 冷水冷却至室温；另以蒸馏水2．0ml，同上操作做空 SartoriusBp21lD电子天平(德国Sartorius公司)。 白对照，于 490处测定吸收度 (Abs)。以标准品葡 1．2 材料 蝉花 (浙江中医药大学中药饮片厂)； 萄糖量(g)为横坐标，Abs为纵坐标，得回归方程： 葡萄糖标准品(中国药品生物制品鉴定所)；透析袋 Y=0．0077X+0．0053，R=0．9997，说明标准品葡 和活性碳 (华东医药股份有限公司)；苯酚、硫酸、三 萄糖量在 0—110Ixg范围内，与Abs呈 良好的线性 氯甲烷、正丁醇等试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 关系。 2 方法与结果 2．3．2 仪器精密度 取标准品溶液0．9ml，加蒸馏 2．1 蝉花粗多糖的制备 称取蝉花 500g，加8倍 水至2．0ml，按标准曲线制备项下测定Abs值6次， 量水50℃温浸 3次，每次5小时，过滤，滤液40℃ 值分别为 0．6998、0．6997、0．6999、0．7000、 以下减压回收溶剂至400mL，加95％乙醇使其浓度 0．6998、0．6997，RSD ：0．02％ 。 为75％，静置 24小时，析出之沉淀即为蝉花粗多 2．3．3 样品中多糖含量测定 精密称取蝉花总多 糖。 糖适量，用蒸馏水配制成0．2mg