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江西中医药
1．4．2 心肌细胞A／R模型建立 心肌细胞生长接
1 材料与方法
1．1 实验药物 丹参总酚酸、三七总皂苷、降香油 近融合状态时，对培养心肌细胞换用模拟缺氧缺糖
(本草天工制药有限公司提供)。 溶液，置于持续95％N2～5％CO2平衡的A／R装置
1．2 实验动物 清洁级 Sprague—Dawley(SD)新 (37~C)中缺氧孵育3h后，再换用模拟再灌注溶液
生大鼠(1—3d)，雌雄不限(GCI公司提供)。 于95％O 一5％CO 复氧孵育2h。
1．3 主要试剂 L—NAME、胰蛋 白酶、Brdu、 1．4．3 冠心舒有效部位拆方实验
HEPES(均为 Sigma公司产品)；M1-r(Ameresco公司 1．4．3．1 按冠心舒分离所得的有效部位 ，根据原方
产品)；乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒 (Beckman公司产
的基本配比比例，设计了四因素四水平正交设计表
品)；MDA、SOD、GPx、Catalase测定试剂盒 (均为
(以人每次服用剂量计算 ，单位：g)，如表 1～2所
Beckman公司产品)；胎牛血清、MEM培养基 (GIB—
示 。
COBRL公司)；其余化学试剂均为分析纯。
1．4 方法 1．4．1 心肌细胞的分离培养 参照 表 1 因素水平表
Spector等方法，取出生 1～3d内SD乳鼠心脏，分离
心室组织，经0．1％胰酶消化分离，用含 15％胎牛血
清的MEM培养基混悬后置 CO：培养箱 (5％CO ，
37℃)培养2h去除成纤维细胞，将悬浮的心肌细胞
基金项 目：江西省 自然 (青年)科学基金计划项 目(20114BAB205077)。
{ 作者简介 ：陈俊杰，男，在读硕士。TelE—mai：jonejay_chen@foxmail．oom。
} 通信作者：范玫玫，女，研究员 ，硕士生导师。Tel：(0791E—mail：f_mei@163．corn。
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JIANGXIJOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE
表2 四因素四水平设计方案表 ／mg·L 胞分组进行实验 (7／,=8)：实验分组为：正常对照组
(Contro1)、A／R组、1％的DMSO对照组，以及相应
处理组。
1．5 观察指标及方法
1．5．1 细胞存活率 采用 MTr比色法检测；96板
每孔加入 MTT(5×10 mg／L)20tzL，继续培养4h，
再加入 1501xLDMSO，振荡 10min，用酶联免疫检测
仪测定各孔细胞的490nm吸光值。设不含细胞、只
加孵育液的空白对照，记录结果。细胞存活率 (％)
= (各试验组吸光值／对照组吸光值)×100％。
1．5．2 生化检测 实验结束后各组分别取孵育液
2001xL，Beckman生化 自动分析
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