中国蚌科线粒体1Sr6RNA序列变异和系统发育.pdfVIP

第 27卷 第 3期 水 生 生 物 学 报 Vo1．27．No．3 200 3年 5 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA May ，2 0 0 3 中国蚌科线粒体 16SrRNA序 列变异及 系统发育 黄艳艳 ，2 欧阳珊 吴小平 刘焕章2 (1．南 昌大学生物科学工程系，南 昌 330047；2 中国科学 院水生生物研 究所 ，武汉 430072) 摘要 ：首次测定了中国淡水贝类—— 蚌科 (Unionidae)13个属代表种类 的线粒体 16SrRNA部分序列 。用 Clusta1．X排 序软件进行 16SrRNA序列 的对位排列 ，序列总长度 为 305--320bp。通过 Mega2．0软件对所得线粒体 16SrRNA片 段序列进行 比较 ，共发现 108个碱基存在变异 ，其 中包括 77个简约信息位点 ，并用 “Pairwisedistance”计算 了各属 间 的相对遗传距离 。以贻贝为外类群 ，采用 Mega2．0软件 中的 “Neighbore．Joining”法得到惟一一个分子系统树 ，系统树 各分支 的置信度 由 “Bootstrap”1000循环检验 。结果表 明：分布于 中国的蚌科形成 三个 明显 的类群 ，第一个类群 ，包 括 帆蚌属 、蛏蚌属 、丽蚌属 和尖锄蚌属 ；第二个类群 ，由矛蚌属 、扭蚌属 、裂脊蚌属 、鳞皮蚌属 、尖嵴蚌属 、楔蚌属和珠 蚌属组成 ；第三个类群 只包括无齿蚌和冠蚌两个属 。由此可 以看 出 ，它们有可能分别隶属于三个不 同的亚科 ，即小 方蚌亚科 (帆蚌属 、蛏蚌属 、丽蚌属和尖锄蚌属)、无齿蚌亚科 (无齿蚌属和冠蚌属)和珠蚌亚科 (矛蚌属 、扭蚌属 、裂 脊蚌属 、鳞皮蚌属 、尖嵴蚌属 、楔蚌属和珠蚌属)，由此证 明小方蚌亚科在 中国的存在 ，并且 ，对几个属 的分类位置作 了调整 。其 中鳞皮蚌属和蛏蚌属原来属于无齿蚌亚科 ，根据线粒体 16SrRNA的结果 ，前者应该放在珠蚌亚科 ，后者 则归于小方蚌亚科 ；帆蚌属 、丽蚌属和尖锄蚌属原来都放在珠蚌亚科 ，现把它们放在小方蚌亚科可能更为合适 。 关键词 ：蚌科 ；线粒体 DNA；16SrRNA；系统发育 中图分类号 ：Q959．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—3207(2003)03—0258—06 随着分子生物技术的发展和普及 ，分子系统学 已 采 自江西鄱 阳湖 ，具体见表 1。所有标本活体带 回 被广泛应用到各种动物的系统发育研究 ，但研究主要 实验室 ，每个属取一个标本 ，用 95％的酒精 固定 ，待 集中在脊椎动物中的哺乳类 、鱼类 、鸟类_1 j，对无脊 测序用 。选用贻 贝做 外类群 ，其序 列从 GenBank中 椎动物的系统发育研究 国内报道较少 。大量的资料 下载所得 (AF023571)。 说明，线粒体 16SrRNA能很好的用于系统发育研究 。 1．2 基 因组 DNA提取 总 DNA提取根据 Ausubel 其中Geller等_6j利用 16SrRNA序列探讨 了贻 贝的系 的方法 加 以修 改 。提取 液含 1％ 的 SDS，1mg／mL 统发育 问题。Lydeard等_7通过 16SrRNA序列研究 了 proteinaseK，56％消化过夜 ，经过酚、酚 一氯仿 (氯仿 ： 北美淡水 贝类的系统发育关系。线粒体 16SrRNA基 异戊醇 =24：1)和氯仿 (氯仿 ：异戊醇 =24：1)分别抽 因已被广泛应用到各类动物的系统发育 中，而 中国淡 提一次。无水 乙醇沉淀 ，TE(pH=8．0)溶解稀释后 水贝类 的该项研究则是一个空 白。 即可用于 PCR反应 。 通过对 16SrRNA序列变化的研究 ，来探讨 中国 1．3 PCR扩增和序列测定 PCR扩增使用常规方 淡水蚌科 的系统发育 问题 ，试 图直接从遗传物质本 法 ，所用