HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量.doc

描述：目的 测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，为止咳定喘丸的质量研究提供依据。 方法 采用高相液相色谱（HPLC）法测定止咳平喘丸中苦杏仁的活性成分苦杏仁苷的含量；使用Agilent SB-C18（4.6 m... 　 ? 　2.3.2?线性关系考察?分别精密吸取对照品溶液1、5、10、15、20、25?μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程为Y=117?632X-347?713，r=0.9995。结果表明，苦杏仁苷对照品进样量在0.0824～2.0600?μg范围内与峰面积有良好的线性关系。?　　2.3.3?精密度试验?精密吸取对照品溶液10?μl，重复进样6次，记录色谱图，按峰面积计算，结果RSD=0.18%，说明仪器精密度良好。?　　2.3.4?重现性试验?取同一批号样品6份，分别依法处理后测定。结果RSD=0.64%，表明该方法重复性良好。?　　2.3.5?稳定性试验?取同一批号样品溶液，在室温条件下放置，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24?h进样，测得峰面积值RSD=0.78%，表明供试品溶液在24?h内基本稳定。?　　2.3.6?加样回收率试验?精密称取已知含量的供试品（批号：130203，苦杏仁苷含量为3.28?mg/g）6份，每份0.5?g，精密加入苦杏仁苷对照品溶液（0.1950?mg/ml）2?ml，按供试品溶液方法制备，依法测定含量并计算回收率（表1）。? 　　2.4?样品含量的测定?　　取3批样品，按供试品溶液方法制备，分别进样10?μl，依法测定，采用外标法计算样品中苦杏仁苷的含量（表2）。? 　　3?讨论?　　本实验中，苦杏仁苷在207?nm处有最大吸收，选用207?nm作检测波长，苦杏仁苷峰有最大峰面积，其他组分在此无干扰吸收。?　　苦杏仁苷的含量测定方法现多用HPLC法。在实验过程中，曾按照参考文献，用各种比例的甲醇-水、乙腈-水作流动相，发现系统的稳定性?太差，无法检测，且出现双齿峰，改用乙腈-水后，得到单峰，稳定性明显改善，且灵敏度也有所提高，苦杏仁苷色谱峰基本上达到了基线分离。经过反?复实验，最终建立了适合本品的含量测定方法，流动相比例为乙腈-0.1%磷酸（8∶92）。?　　综合考虑提取分离中药有效成分常用的各种方法的优缺点，本实验以甲醇为溶剂，由于溶剂浸提法、回流提取法和索式提取法提取时间较长，超声提取法提取时间短，且无其他组分峰干扰，因此选择超声提取法作为止咳平喘丸中苦杏仁苷的提取方法。?　　经笔者调研发现，在气候变化明显的季节，尤其是秋冬季节，咳嗽气喘的患者很多。此药功能主治为清热宣肺，止咳平喘。用于咳嗽气喘，久咳不止。?用途广泛且有一定的市场占有率，但原标准过于简单，标准中只对其性状和检查项确定了检验标准，无其他检定方法，笔者认为本研究阐述的检验方法专属性强、重?现性好、阴性对照无干扰、方法可靠，使止咳定喘丸原有的质量标准得到充实和完善，更能准确、有效地控制止咳定喘丸的质量标准。?