HPLC测定心脉通胶囊中葛根素的含量.docVIP

高效液相色谱法测定心脉通胶囊中葛根素的含量 [摘要] 目的：建立高效液相色谱法测定心脉通胶囊中葛根素的方法。方法：样品采用超声提取后注入高效液相色谱仪应用面积外标法测定葛根素含量。色谱柱：十八烷基键合硅胶柱；流动相：甲醇-水（20：80）；流速：1.0ml/min；检测波长：245nm；柱温：40℃。结果：葛根素在18ug/ml-144 ug/ml范围内呈良好的线性关系，葛根素的平均回收率为99.94%，RSD=1.2%。结论：本方法简便快捷，准确可靠，确保了心脉通胶囊的有效性。 [关键词]心脉通胶囊 高效液相色谱法 葛根素 含量测定 心脉通胶囊为中药复方制剂，由当归、决明子、钩藤、牛膝、丹参、粉葛、槐米、毛冬青、夏枯草、三七十味药组成，其中粉葛为本品治疗高血压﹑高脂血症的有效中药之一。粉葛中含有多种黄酮类成分，其主要为大豆异黄酮苷、大豆异黄酮苷元、葛根素等，其中葛根素为治疗心血管疾病的有效成分，因此在本品质量标准中建立葛根素的含量测定，以保证工艺的稳定性及产品的质量。 1、仪器与试剂 仪器：TJ-2000高效液相色谱仪，UV2000可变波长紫外分光检测器，UV-1700岛津紫外可见分光光度计，HS6150D超声仪。 试剂（药）：甲醇为色谱纯试剂，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。 对照品：葛根素对照品购于中国生物制品检定所，批号110752-200511。 样品：由昆明邦宇制药有限公司提供，批号20050801200603022007010120070802 2、方法与结果 2.1检测波长的确定 取对照品溶液及供试品溶液，以30%乙醇为空白校正，在200-350nm范围内进行紫外扫描结果在245nm波长处对照品及供试品均有最大吸收，因此取245nm为检测波长。 2.2色谱条件的确定 曾参照中国药典粉葛中葛根素的含量测定以甲醇-水（25：75）为流动相，流速：1ml/min，以C18柱为分析柱，柱温：40℃，进行试验研究，结果未达到满意的分离效果，后将甲醇与水的比例调整为20：80，其余条件不变，获得了满意的分离效果，且阴性样品无干扰，故以甲醇-水（20：80）为流动相，流速：1ml/min，柱温：40℃。 2.3对照品溶液的制备 葛根素对照品易溶于甲醇及稀乙醇中，故实验选用30%乙醇直接溶解制成每1ml含80μg的溶液，即得。 2.4供试品溶液的制备 2.4.1提取方法的考察 取本品内容物2g（批号，精密称定，置锥形瓶中，加30%乙醇50ml，称重，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，微孔滤膜过滤，备用。 另取本品内容物2g（批号，精密称定，置具塞三角瓶中，加30%乙醇50ml，称重，回流30分钟，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，0.45μm微孔滤膜过滤，备用。 分别精密吸取上述两种供试品溶液及对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，结果见表1： 表1 提取方法考察结果 提取方法 超声30分钟 回流30分钟 葛根素含量（mg/粒） 0.4872 0.4573 从表1可见，超声提取与回流提取相差不大，故试验选用超声提取。 2.4.2提取时间的考察 取本品内容物2g，3份，精密称定，置具塞三角瓶中，加30%乙醇50ml，称重，分别超声处理10、20、40分钟，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，微孔滤膜过滤，备用。 分别精密吸取上述供试品溶液及对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，结果见表2。 表2 提取时间考察结果 提取时间（分钟） 10 20 30 40 葛根素含量（mg/粒） 0.3977 0.4346 0.4872 0.4856 由表2可见，超声处理30分钟后含量几无变化，故试验选择提取时间为30分钟。 综上所述，供试品溶液的制备方法为：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。 2.5粉葛阴性溶液的制备 取粉葛阴性样品1g，按供试品溶液的制备方法制备粉葛阴性样品溶液。 2.6线性关系考察 精密称取葛根素对照品4.5mg,置25ml量瓶中，加30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml置5ml量瓶中，加30％乙醇稀释至刻度，摇匀，配成浓度分别为0.018mg/ml、0.036mg/ml、0.054mg/m