Vero细胞培养过程中球转球接种工艺的可行性研究..pdf

维普资讯 Vo1．25N。．6 华 东 理 工 大 学 学 报 1999—12 Journat。fEastChinaUniversityofScienceandTechnology 567 0 7一 }7《 Vero细胞培养过程中球转球接种工艺的可行性研究_。 I．动态球转球过程 q引 孙祥明， 谭文糨 张元* ， 周亚竞， 华 平 — ● - ‘ ’ _ - - 一 _ ‘’ ’ ’ - 。 ～ (华东理工大学生物反应嚣工程 国家重点实验室，上海 200237) 摘要：研究了动态球特球接种 Vero细胞培养过程 中的细胞生长特性，提 出了细胞球转球的机 理．通过与消化接种的比较 ，证 明在动态球转球接种的细胞培养过程 中．细胞的比生-R速率和增殖 倍数均较低 ，因而认为以动态A-式实现细胞球转球接种不适告于细胞的大规模培养过程 。 艄 中图分类号：Q952； 文献标识码A： 文章编号撒：1∞6—080(1999 文 Vero细胞不具有致瘤性 ，广泛地应用于病毒疫 过夜，待用。 苗 “和重组蛋 白口的生产过程。Vero细胞必须经过 转瓶：自制，总体积 I50mL，实验过程 中装液 逐级放大培养才能达到生产规模。在放大过程中，采 70mL。 取的接种方式(即消化接种或球转球接种)对整个过 培 养基：DMEM (Dulbecco’sModifiedEagle 程的效率非常重要。当反应器规模较大时．消化接种 Medium，SigmaUSA)，使用时加 l0 的小牛血清 由于操作上的困难．很难得到单分散的细胞悬浮液， (自制)。 细胞常凝聚成细胞团，这种细胞团不利于细胞的贴 1．2 实验方法 壁和生长。球转球接种工艺则是在微载体培养过程 1．2．1 取样方法 在无菌超净台内，将转瓶置于磁 中直接以上一级培养物作为种子接入下一级反应器 力搅拌器上搅拌 ，转速为45r／rain，用 lmL移液管 中．通过细胞在 旧球与新球 的重新分配而实现扩大 取样，每次取样尽量保持取样位置接近于培养液液 培养．其最大优点是操作简便。董树沛0j及张立 曾 层的中部．以减少实验误差。 利用此法在反应器中进行了Vero细胞灌注培养。 1．2．2 细胞计数 取样后 ．向样品瓶中加 lmL结 对细胞在微载体之间的转移机理以及球转球接种工 晶紫染色液 (1g／L的结晶紫，0，Imo[／L柠檬酸溶 艺的操作范围尚有待深入认识，球转球接种培养工 液)．并置于 37℃的培养箱 中保温 lh。取出后 ，反复 艺与消化接种培养工艺的比较研究也未见报道。本 振荡至细胞核脱落．用血球计数板点样计数细胞核 文着重研究了动态球转球接种对细胞生长的影响， 的密度。当细胞浓度过高时．加入结 晶紫染色液稀 分析了在动态球转球过程中细胞的转移机理 ，对动 释 。每次计数重复3次．取平均值 。 态球转球接种的可行性进行了讨论。 1．2．3 动态球转球实验方法 取 四只转瓶分别标 以 1．2 ，3 ．4 。每瓶装液 70mL。微载体 5rag~ 1 材料与方法