动物细胞培养基的研究进展.pdf

课程论文 关于动物细胞营养基的研究进展 G-B 摘要 动物细胞培养基是体外细胞培养的重要因素，本文就动物细胞培养基的发展进行了系统总结。 尤以无血清培养基为主，整理出其发展过程，主要成分及其应用发展前景。 关键词 动物细胞，培养基，无血清 1.前言 植物细胞培养技术已相当成熟，应用也很广泛。近年来，动物细胞培养技术也已从单纯的实验操 作扩展到生物学研究和商业利用的许多方面，成为广泛采用的技术手段。在细胞培养发展史中，细胞 培养基的发展占有很重要的位 。同时，培养基研究也属于笔者所学专业--营养学的分支，希望在写 作此文的学习中能为以后生存发展起一定指导作用。 2.动物细胞培养基发展的 3 个阶段 2.1 天然倍养基阶段 这一阶段是动物细胞培养基的最初及摸索阶段。此阶段早期机械模拟细胞的体内生存环境，直接 采用某些组织凝块，生物性液体和组织提取液等作为组织细胞的培养基为特征。如血浆凝块、血清、 1 淋巴液、胚胎浸液等 。据记载，最早进行组织培养的是Roux 采用温生理盐水培育鸡胚组织，使之存 活了数月之久。随之，美国生物学家Harrison 在无菌条件下，以淋巴液为培养基成功的在试管中培养 了蛙胚神经组织达数周，创立体外培养方法。后期便开 了对维持细胞生长的营养成分的研究，并为 合成培养基阶段的到来打下了基础。 2.2 合成培养基阶段 合成培养基是根据已知细胞所需物质的种类和数量严格配制而成的。合成培养基由于成分清楚， 故可通过改变或调节各种成分的种类、数量和比例，观察细胞生物特有的反应性变化，测知细胞与外 界环境的关系，了解细胞生存条件，并可诱导细胞定向分化等。 常用合成培养基的种类和特点一般是依据条件、经验和培养基的特点选用。目前常用的是 MEMEagle,RP M 11640培养液等。 绝大多数细胞的体外培养，需要在合成培养基中补充一定量的成分不明确的生物性液体或组织提 取液才能支持细胞的生长增殖，其中血清因来源丰富且易于保存而成为被最广泛采用的培养基添加 物，最常用的为小牛血清。血清的主要作用在于给细胞提供生长增殖所需的激素、生长因子、转移蛋 2 白和其它营养物质但由于血清中所含的成分复杂给动物细胞培养造成了诸多不利包括 1.血清中含有 某些不利于细胞生长的毒性物质或抑制物质，对某些细胞的体外培养有去分化作用。2.血清中大量成 分复杂的蛋白质给疫苗、细胞因子、单克隆 体等下游培养产物的分离纯化带来很大的困难。3.批次 与批次之间血清质量的差异，会影响细胞生长，最终影响产品质量。4.血清易被支原体和杂质污染。 5.血清非常昂贵，血清的费用占到培养基费用的50%，致使生产成本大幅度提高。也正是由于血清的 应用存在上述问题才促使人们对无血清培养基的研究和应用日益重视。 2.3 无血清倍养基阶段 无血清培养基就是在合成培养基的基础上，引入成分完全明确的或部分明确的血清替代成分，使 培养基能满足动物细胞培养的要求，又可有效的克服因使用血清所引发的问题。无血清培养基可以是 完全采用已知分子结构和构型组分的低蛋白或无蛋白培养基。因而它不仅为研究和阐明细胞生长、增 殖和分化的调节机制提供了有力的工具，而且为现代生物技术尤其是细胞工程的应用准备了更好的条 3 件 。 3.无血清培养基 3.1 无血清培养基的发展过程无血清培养基的发展大致经过了三代，第四代培养基的研制开发并投入 4 市场将成为发展趋势 (见表1)。 3.2 无血清培养基的组成及其主要补充因子 无血清培养基一般认为是由两部分组成，即基础培养基和替代血清的补充因子。 3.2．1 基础培养基 无血清培养基的基础培养基一般为与所需培养细胞相应的合成培养基，是按细胞生长需要由一定 比例的氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等组成的。在对不同的细胞进行培养时可根据需要对基础培 养基和某些组分进行相应的调整。 3.2．2 补充因子 补充因子是无血清培养基中用于代替血清的各种因子的总称。这些补充因子可使培养基既能满足 动物细胞培养的要求，又能有效避免血清培养基成分不明确、有批间差异、常被病毒和支