耐盐药蒲公英(TaraxacumofficinaleWeber)愈伤组织筛选及生理生化特性分析.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, July 25; 24(7): 1202-1209 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告 耐盐药蒲公英(Taraxacum officinale Weber)愈伤组织筛 选及生理生化特性分析 张新果, 陈显扬, 姜丹, 李银心 中国科学院植物研究所光合作用与环境分子生理学重点实验室, 北京 100093 摘 要: 为获得耐 1.5% NaCl 的药蒲公英(Taraxacum officinale Weber)愈伤组织, 以药蒲公英叶片外植体为材料诱导愈 伤组织。以 NaCl 为选择因子, 从愈伤组织直接筛选。在选择培养基上, 大部分愈伤组织褐化死亡, 个别褐化死亡的愈 伤组织周围有少量新的细胞团长出, 将其转接到新鲜的选择培养基上, 每 3 周继代一次, 经 3 个月继代筛选获得了耐 1.5% NaCl 的药蒲公英细胞团。以普通愈伤组织为对照, 发现随着 NaCl 浓度升高, 耐盐愈伤组织的相对生长率下降但 显著高于对照; 且随着盐胁迫处理时间延长持续升高, 而普通愈伤组织对照几乎停止生长, 说明耐盐愈伤组织具有相 对稳定的耐盐性。在蛋白水平上, 耐盐愈伤组织与对照愈伤组织差异明显, SDS分析显示: 耐盐愈伤组织比对照 多出一条34 kD 大小的蛋白带, 且30 kD 、18 kD 左右的蛋白带明显上调。相同处理条件下耐盐愈伤组织脯氨酸的增加 幅度高于对照。盐胁迫条件下, 耐盐愈伤组织的超氧化物歧化酶(Super oxidase dimutase, SOD) 、过氧化物酶(Peroxidase, POD)和过氧化氢酶(Catalase, CAT)活性明显高于对照,且随着处理时间的延长和盐浓度的增加呈现升高的趋势, 而对照 则呈现先升高后下降的趋势。结果说明耐盐愈伤组织一方面通过小分子有机溶质如脯氨酸的方式调节其渗透平衡, 另一 方面还可通过提高抗氧化能力降低盐分造成的次级伤害。积累蛋白也可能是耐盐愈伤组织调节渗透平衡的一种方式。 通过生理生化分析确定我们获得的耐盐愈伤组织为耐盐变异体。 关键词: 药蒲公英, 组织培养, 变异愈伤筛选, 耐盐性, 活性氧清除剂, 渗透平衡 Selection and Characterization of Salt-tolerant Calli of Taraxacum officinale Xinguo Zhang, Xianyang Chen, Dan Jiang, and Yinxin Li Key Laboratory of Photosynthesis and Environmental Molecular Physiology, Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100093, China Abstract: In order to obtain salt-tolerant calli of Dandelion (Taraxacum officinale Weber), calli were induced from leaf explants of Da