大肠杆菌感受态制备与转化实验.pdfVIP

2009 年第 4 期 NO.4,2009 总 第 2 7 卷 毕 节 学 院 学 报 Vol.27 (总 第 105 期) JOURNAL OF BIJIE UNIVERSITY General No.105 大肠杆菌感受态制备与转化实验 (广西师范大学生命科学学院，广西 桂林 541004） 摘 要： 关键词： 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： 大肠杆菌的制备与转化实验在生物的众多研究领域（如基因工程、细胞生物学、遗传学、微生 物等）内均有涉及，该实验一般用氯化钙处理(Calcium-induced competence)进行操作，这样简单化了 实验原理和操作以及仪器的使用，因而也为本科生进行自主研究性实验提供了理论基础和技术指导。 但在教学过程中，由于实验人数多，指导老师讲授时间有限，实验历时较长及实验讲义过于简单等 原因，教师在细节指导和注意事项上难以面面俱到，学生操作规范和操作时间的把握也易出现疏漏， 最终实验成功率不高，且学生更不能从简单的讲义上深入的理解实验操作意图及整套实验的研究机 理。针对以上问题，笔者在简化了大肠杆菌实验方案的基础上进行了如下设计，掌握氯化钙法制备 大肠杆菌感受态细胞的方法，以 pUC19 质粒转化大肠杆菌为例，掌握转化的基本原理和方法技术并 验证 DNA 是遗传物质等。 1 实验原理及目的 一般而言，大肠杆菌（Escherichia coli ）在氨苄青霉素的环境不能生长，通过转化实验，用质粒 作为载体把质粒中携有能抵抗氨苄青霉素的基因带到大肠杆菌细胞中，此基因能通过复制、表达从 而实现遗传信息的转移，使大肠杆菌细胞出现抗氨苄青霉素的遗传性状，最终可以在含氨苄青霉素 的培养基中生长。 质粒在进入细胞时，大肠杆菌细胞必须处于最易接受外源 DNA 片段的生理状态，即感受态。因 此在转化实验之前，还要进行大肠杆菌感受态细胞的制备。 更深入的研究中，往往把要在大肠杆菌中表达的外源基因插入在含有青霉素抗性的质粒中，根 据有无抗性筛选出转化的细菌。 2 实验设备及药品 2.1 设备 超净工作台、低温离心机、离心管、-70℃冰箱、普通冰箱、恒温摇床或水浴恒温振荡器、恒温 水浴箱/锅、高压灭菌锅、恒温培养箱、移液枪/移液器、枪头、冰盒、培养皿、涂布棒、三角瓶、接 种环、分光光度计、微波炉等。 收稿日期：2008-12-15 基金项目：广西教育科学“十五”规划课题，项目编号：2004C30。 作者简介：王 威（1982— ），男，广西桂林人，广西师范大学生命科学学院研究生。研究方向：生物课程与教学论。 杨 华（1955— ），男，广西桂林人，广西师范大学生命科学院副教授，硕士生导师。研究方向：生物课程与教学论。 83 2.2 药品 胰蛋白胨、酵母提取物、氨苄青霉素、pUC19 质粒、大肠杆菌 DH5 α或其他具有α互补能力的 株菌、琼脂、10%甘油（用于分子生物学级别的甘油）等。 3 实验方案及说明 其中表 1、2 、3 为三个实验准备方案，之间无先后排序；表 4 、5 为实验方案。参考时需标出常 规的必需时间，如过夜培养、高压灭菌及方案规定