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研究论文 研究论文 刘 婷 ，等 ： 微板核酸杂交检测芽孢杆菌属的方法建立 微板核酸杂交检测芽孢杆菌属的方法建立 刘 婷 ， 冯守帅 ， 辛 瑜 ， 王 武 ， 杨海麟 * （江南大学 生物工程学院 ，江苏 无锡 214122 ） 摘 要 ： 以白酒发酵过程中的优势菌枯草芽孢杆菌为模式菌株 ， 针对具有高保守性及特异性的 16S rRNA 设计一组核酸探针 ， 建立了对芽孢杆菌属进行定性和定量分析的新型的微板核酸杂 交检测方法 ，优化了关键检测条件 。 结果表明 ，当 S1 酶反应温度为 42 ℃ 时 ，芽孢杆菌属检测探 针能分开目标序列仅差一个碱基的近缘属 。 当捕获探针和信号探针工作浓度均为 5 nmol/L ，与 分析探针杂交温度都为 50 ℃ ，杂交时间分别为 60 min 和 15 min 时 ，检测信号的强弱与细菌数 呈良好的线性关系 ，能实现定量检测 ，灵敏度高达 2 。 本方法提供了一个快速定 1.33×10 cells/mL 性定量的检测技术 ，具有很好的应用于白酒发酵过程中芽孢杆菌属实时监测的潜力 。 关键词 ： 微板核酸杂交技术 ；芽孢杆菌属 ；16S rRNA ；定性 ；定量 中图分类号 ： 文献标志码 ： 文章编号 ： — （ ） — — Q 815 A 1673 1689 2015 02 0175 08 Development of A Novel Microplate Sandwich Hybridization Assay for Detection of Bacillus * LIU Ting ， FENG Shoushuai ， XIN Yu ， WANG Wu ， YANG Hailin （School of Biotechnology ，Jiangnan University ，Wuxi 214122 ，China ） Abstract ： In order to detect bacteria from the complex ecological environment for liquor-making ， we developed a novel and efficient assay for identification and quantification of bacteria.We selected Bacillus to be experimental bacterium.Three oligonucleotide probes targeted 16S rRNA of Bacillus were respectively designed.Then the assay based on microplate sandwich hybridization assay with the aid of S1 nuc