糖尿病大鼠心房肌细胞急性分离方法的改良.pdfVIP

中国医科大学学报 第44卷 第2期 2015年2月 ·164· JournalofChinaMedicalUniversity Vol.44 No.2 Feb.2015 ·技术方法 · 糖尿病大鼠心房肌细胞急性分离方法的改良 李斌，张迪，潘一龙，王菁卓，李晓东 （中国医科大学附属盛京医院心内科，沈阳 110004） 摘要 目的 建立稳定的成年糖尿病大鼠心房肌细胞急性分离的方法，为糖尿病大鼠心房肌细胞电生理研究提供材料。方法 采用链脲佐菌素（STZ）制作Ⅰ型糖尿病大鼠模型，采用Langendorff灌流装置及改良的灌流法提取心房肌细胞，采用形态学及免 疫荧光染色对心房肌细胞进行鉴定，采用膜片钳技术记录心房肌动作电位。结果 STZ可建立稳定的Ⅰ型糖尿病模型。改良 的灌流法可获得梭形、耐钙的心房肌细胞。免疫荧光结果提示心房肌细胞Kv1.5离子通道蛋白阳性。膜片钳检测结果提示该 方法提取的心房肌细胞能够产生动作电位。结论 改良的灌流法适用于糖尿病大鼠心房肌细胞的急性分离，有助于糖尿病心 房肌细胞的电生理研究。 关键词 糖尿病；心房肌细胞；分离 中图分类号 R319 文献标志码 B 文章编号 0258-4646（2015）02-0164-04 网络出版地址 AModifiedMethodforAcuteIsolationofAtrialMyocytesinDiabeticRats LIBin，ZHANGDi，PANYi⁃long，WANGJing⁃zhuo，LIXiao⁃dong （DepartmentofCardiology，ShengjingHospital，ChinaMedicalUniversity，Shenyang110004，China） Abstract Objective Toestablishastablemethodforacuteisolationofatrialmyocytesindiabeticrats，soastoprovidematerialsforelectrophysio⁃ logicalstudyofdiabeticrats.Methods Streptozotocin（STZ）wasusedtoestablishtypeIdiabeticmodel.Atrialmyocyteswereisolatedwithmodi⁃ fiedperfusionbufferbyLangendorffperfusion.Theatrialmyocytesweremorphologicallyobservedwithopticalmicroscopeandidentifiedbymorphol⁃ ogyandimmunofluorescencestaining.Theactionpotentialwasrecordedbypatchclamptechnique.Results STZcanestablishastabletypeIdia⁃ beticmodel.Themodifiedperfusionmethodcanyieldcalciumtolerantandspindleshapedatrialmyocytes.Immunofluorescenceindicatedthatatrial myocyteswerepositiveforKv1.5whichwasexpressedinatrialmyocytes.Theatrialmyocytesobtainedbythismethodwereabletogenerateactionpo⁃ tentials.Conclusion Themodifiedperfusionmethodissuitableforacuteisolationofatrialmyocytesinratswithdiabetesmellitus，whichmayhelp tostudytheelectrophysiologyofdiabeticheart. Keywords diabetes；atrialmyocytes；isolation 糖尿病是由于胰岛素功能缺陷或分泌不足引 片钳实验的