AFLP技术在天麻遗传变异研究中的初步应用.pdfVIP

维普资讯 植物生理学通讯 第43卷 第 1期，2007年 2月 141 AFLP技术在天麻遗传变异研究中的初步应用 谢渊 ·，张小蕾z，，李毅 ，蒋朝晖 ，单可人 ，吴晓黎 贵阳医学院-分子生物学重点实验室， 医学检验系，贵阳550004； 贵阳中医学院，贵阳550003 PreliminaryAppficationofAFLPforStudyonGas~od／ae／ataGeneticDiversity XIEYuan 。ZHANG Xiao．Lei·’，LIYi，JIANG Zhao．Hui，SHAN Ke．Ren ，W U Xiao．Li KeyLaboratoryofMolecularBiology,2DepartmentofLaboratoryScience,Gu~angMedicalCollege,Guiyang550004,China； ’GuiyangCollegeofTraditionalChineseMedicine,Guiyang550003,hCina 提要：为探讨AFLP技术在天麻遗传变异研究的应用，选取 11对AFLP引物对 11份不同来源天麻品种之间遗传关系进行 AFLP分析的结果表明，11对引物共扩增出543条扩增带，每个引物组合在个体间扩增条带的数 目有33~83条，平均为 49．5．采用UI~MA法聚类分析得到的天麻各品种之间遗传距离为0．0792,-0．6OO4。UI~MA聚类图显示，11份样品分为 两大组群，其中的贵州天麻一群又分为2个组群． 关键词：天麻；扩增片段长度多态性 A【FLP)；遗传变异 天麻作为名贵中药，对其研究的报道 已很多 3 方法 (邓士贤和莫云强 1979；周铉和陈心启 1983)，但 3．1基因组DNA的提取 采用我组改进的CTAB／ 对天麻遗传多样性的报道还少见。本文用扩增片 SDS方法(李毅和张小蕾 2005)。 段长度多态性(amplified fragmentlength 3．2 模板DNA酶切 ．连接 用限制性 内切酶MseI polymorphism，AFLP)技术(Vos等 1995)，构建 和PstI双酶切，然后连接上通用接头。酶切 ．连 了11个天麻品种的DNA指纹图谱，采用其遗传 接混合液包括 2．5ULDNA (200ng．L )、MseI3 多样性对天麻品种鉴定进行探讨，以期能为中药 U、PstI3U、NEB缓冲液 1．0gL、MseI接头和 fI 天麻提供一种稳定、快速和准确的鉴定方法。 接头 1．0I．tL、lOxLigase缓冲液2．5 L、牛血清 白蛋I~(BSA)0．2 L、T4．DNA连接酶0．5 L， 材料和方法 加双蒸水至25 L，于37℃下酶切 ．连接 10h。 1材料 3．3预扩增 预扩增采用M+0／P+0引物组合，取 贵州大方地区、乌当地区、雷公山地区野生 2 酶切．连接完成的DNA样品，依次加入0．6 和人工栽培天麻的3个品种 ： 红‘杆天麻 ’(Ga． MseI引物M0o(50ng· )、0．6 LPstI引物 strodiaelataB1．f．elata)、 黄‘杆天麻 ’(G．elata P00(50ng·L )、2．0IxL 10xPCR 缓冲液(50 B1．f．flavidaS．Chow)、 乌‘杆天麻 ’(G．elataf． mmolL·～KC1； 10mmol·L～Tris．HC1，pH 8．3： glaucaS．Chow)以及云南天麻鲜品，材料名称及来 1．5mmolI·一．MgC12；0．1％明胶)、1．2 的MgC12 源见表 1。取其地下块茎或鹦哥嘴嫩芽洗净，刮 (25mmolL· )、1．6 L dNTP (2．5mmolL· )、 弃表皮