RNA干扰技术在肿瘤研究中的应用.pdfVIP

维普资讯 学 肿瘤 ‘}册 2004年 12月第 31禚第 12期 ForeignMedSci OncolSect，December2004，Vo1．31，No．12 RNA干扰技术在肿瘤研究中的应用 郝建宏综述 顾琴龙审校 摘要 RNA r扰 (RNAi)是近几年发展起来的一种阻抑基 表达的新方法，它通过双链 RNA 的介导，特异性地阻断或降低相应基因的表达。目前，随着 RNAi分子机制研究的不断深入，作为研 究功能基 组 力 J具的RNAi技术，有可能选择性地抑制人类疾病相关基因的表达，从而为肿瘤 等人类疾病基因治疗带来新的希望。 关键词 RNA，双链 ；转录，遗传 ；基因表达凋控 ；遗传学技术；肿瘤 中图分类号 R730．5 文献标识码 A 文章编号 1000—8225(2004)12—0883—03 长期以来 ，对基因功能的研究主要依赖基因敲 silencingcomplex，RISC)。siRNA在 ATP提供 的能 除、反义核酸和核酶技术等方法 ，但这些方法存在操 量下解链 ，形成有活性 的 RISC。随后 ，siRNA 引导 作复杂、周期长等问题 ，不适于大规模的基因功能研 RISC和相应序列的mRNA结合 ，使其中的核糖核酸 究。在预估的 3～4万个人类基 因中，对绝大部 内切酶切割 mRNA，导致其降解 ，最终阻断相应基因 分基因的详细功能仍知之甚少 ，因此建立和开发更 的表达 ，这一过程被称为效应阶段。siRNA的反 多的基因功能研究方法显得非常必要。RNA干扰 义链结合到 目的mRNA后 ，不仅诱导 RISC对该基 (RNAinterference，RNAi)技术是近几年发展起来的 因进行降解，同时还激活 RNA依赖的RNA聚合酶 一 项特异性抑制基 因表达 的新方法 ，小干扰 RNA (RNA—dependentRNApolymerase，RdRp)介导的单 (smallinterferingRNA，siRNA)在哺乳动物细胞上的 链 RNA的合成，产生大量的dsRNA，这些 dsRNA再 RNA干扰也获得了成功。RNAi操作的简便性和对 次被 Dicer切割成 21～25bp的 siRNA，进入下一个 靶基因表达抑制的高效性使其成为基因功能研究的 RNAi循环 ，这一过程称为 RNAi的放大效应。 有力手段 ，并使系统性高通量功能基因筛选成为可 因此 ，只需少量的 dsRNA就可产生高特异性的、高 能。RNAi已成为近年来 国际上研究 的热点 ，现就 效性的基因沉默作用。随后 ，Tuschl等 ‘在~flNL动 、 RNAi技术在肿瘤研究中的应用作一综述。 物细胞应用 siRNA成功地介导 了 RNAi，促进 了 8 3 1 RNAi作用机制 ． ● RNAi技术的进一步发展。 RNAi现象首先是 1998年 由 Fire等在线虫 2 筛选肿瘤相关基因 (caenorhabditiselegans)研究中发现，并随后证 明其 已完成测序的人类基因组计划表明，人类约含 属于转录后水平的基因沉默机制 ¨。通过大量的 有3～4万个基因，但现仍对其 中60％基 因的功能 生化和遗传学研究，人们提 出了一种 RNAi作用的 全然不知。即使 了解某些基因的功能 ，但对这些基 可能机制：在植物和一些低等动物细胞中，当长的双 因在整个基因网络中所起的作用 以及它们之问的相 链 RNA(doublestrainRNA，dsRNA)导入细胞后 ，首 互作用还不甚了解。从 RNAi现象首先在 C线虫 中 先被一种 dsRNA特异的核酸 内切酶——Dicer(一 发现~JJx4其进行大规模基 因组筛选 ，大