高效液相色谱定性定量分析方法.pptVIP

液相色谱定性分析 液相色谱定量分析 影响定量分析的因素 影响定量分析的因素 样品制备干扰物质尽可能的分离出去；样品中的待测组分能否尽可能多的转入制备好的样品溶液中；样品制备和储存过程中防止损失和被玷污采用衍生化技术时，反应一定是定量的。 进样技术 采用归一化法、内标法和标准加入法时，进样的误差可以被这些方法的本身的特性所消除； 进样对标准曲线法定量分析的影响主要有以下两个因素：a 进样装置的准确性和精度b 分析人员对进样技术掌握的熟练程度 色谱条件的选择 1 在分离度良好的条件下，柱效的变化对峰面积定量没有 影响，对峰高定量会产生影响； 2 流动相流速变化对归一化法、内标法和标准加入法定量结果无影响，但对标准曲线法的定量结果有影响，而且其对峰面积定量结果的影响比对峰高影响大，因此，在流动相流速不易控制时，如采用标准曲线法定量，宜采用峰高法定量； 3 气相色谱中，柱温会影响保留时间和峰高，且其对峰高的影响随分子量的增加而增大。但柱温对峰面积大小影响较小，所以在气相色谱中多采用峰面积定量。 检测器特性检测器工作的稳定性和线性范围将直接影响色谱定量分析结果的准确性和重复性 1 进样量不能使待测组分的响应值超出检测器的线性范围，选用的进样量最好能使检测器的响应值落到其线性范围的中间部分，此时误差最小 2 选择适当的检测器和检测器的工作参数，使定量分析结果由检测器引起的误差降到最低。 欢迎您！ 黄河三角洲京博化工研究院 Fi响应因子，与待测组分物理化学性质和检测其性质有关 时间窗允许误差5%；时间带允许误差在0.05min~0.25min 所有组分之和按100%计算的方法；并且各成分校正因子一致时可用该方法 与使用面积定量法比较，对于出峰早的组分，由于半高峰宽很小，相对测量误差大，这时用峰高定量更准确。对于出峰晚、峰较宽的组分，用峰面积定量更准确。 为/客/户/生/产/满/意/商/品 为/社/会/培/养/有/益/人/才 诚信 奉献 改善 利他 高效液相色谱定性定量分析方法 申海艳 2012-11-10 色谱分析的目的： 对未知组分进行定性分析 对已知组分进行定量分析 根据色谱图上某个色谱峰的保留时间和该色谱峰 在检测器上的响应信号强度，对该谱峰进行初步定性 定量分析。 液相色谱定性分析 液相色谱定量分析 影响定量分析的因素 色谱峰的定性鉴别： 通过保留值（通常指保留时间）进行定性 需要制定保留时间误差范围 在相同分析条件下 保留时间相同并不一定是同一组分 保留时间不同肯定不是同一组分 用“标样”的保留值定出被测组份的位置 标准加入法 将已知标准物质加到待测样品中，若某一峰增高，且改变色谱柱或流动相组成后仍能使该峰增高，则可基本认定该峰与标准物质为同一物质。 DAD检测器 可同时比较保留时间和紫外光谱图。如果两项均一致，则可基本上确定为同一物质；如果保留时间一致，而紫外图谱有较大差别，则判定两者不是同一物质。 两谱联用技术 1 如果标准物质缺乏或难以获得；或由于结构、理化性质相似，很多物质具有十分接近，甚至相同的保留值，则保留值定性准确度存在疑问。 2 可以运用红外光谱、紫外光谱、核磁共振光谱和质谱对化合物进行定性，目前两用技术有：HPLC-紫外光谱，HPLC-红外光谱，HPLC-MS, HPLC-NMR等。 液相色谱定性分析 液相色谱定量分析 影响定量分析的因素 确定样品的类型，主要成分/痕量成分 使分析条件的分离度（R）大于：1.5 色谱峰的定性，峰一致性测定 检测限及定量限：确定灵敏度及线性范围 用标样建立标准曲线 检查方法的准确度及精确度 用标样定期检查方法 定量分析的具体内容 准确度的衡量 色谱方法是相对定量方法，如不考虑损失及杂质干扰等的因素，其结果同“标样”的准确程度关系密切 一般的衡量方法是做回收率实验或不同方法之间的比较：相关系数 相关系数： 其中，X及Y分别代表不同方法的实验值及平均值 准确度的影响因素 标样的可靠性及其配制的准确度 色谱方法的可靠性 色谱泵的精确度（GPC的影响更大） 进样器的准确度，进样技术 定量分析基本要求 要有纯物质做标准 被定量组分峰要与其他组分达到基线分离 符合定性参数要求 选择合适定量方法 定量分析基本公式 在某些限定条件下，被测组分的浓度与检测器的响应值成正比的关系。（蒸发光散射检测器浓度与峰面积不成线性，分别取对数后呈线性。） Ci=fiAi Ci=fiHi 实际修饰公式