拟南芥PhrIP1基因超表达、GFP和RNAi载体的构建.pdfVIP

长江大学学报(自科版)农学卷 2007年9月第4卷第3期 of Sci V 4No．3 JournalYangtzeUniversity(NatEdit)A卵SciSep．2007，VoL 构建 ，长江大学生命科学学院，湖北荆州434025； 、 z：x-Cr害 —7—’一 ＼华中农业大学农业微生物学围家重点实验室。湖北武汉430070／ 张忠明(华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，湖北武汉430070) 000 [摘要]根据编码拟南芥成膜素相关蛋白(PhrlPl)基因cDNA全序列设计超表达引物，以l～lbp之问 240 序列设计GFP引物和序列内部第24 PCR方法分别扩增出1．8kb、1．0kb和0．216kb的片段，分别克隆至双元表达裁体、GFP载体和RNAi载 用电转化法，将这些重组质粒导入农杆菌GV3101菌株中．PCR扩增结果表明所构建的植物超表达载体 [关键词]拟南莽P^rIPl基因，超表达载体}RNAi载体；GFP融合载体；电转化法 [中圈分类号]Q784 [文献标识码]A 成膜素相关蛋白(phragmoplastin-interacting interference， 形式存在，无法对其表型进行评估。基因敲除技术存在的不足，可以应用RNA干扰(RNA “ RNAi)技术有效地克服L2，¨]。 的‘“副，具有特异性、稳定性、高效、快速以及不改变基因组的遗传组成等特性，为人们研究未知功能的基 因提供了新的反向遗传学手段。在拟南芥和水稻等基因组测序完成后，RNAi技术为植物功能基因组学 研究及植物的遗传改良等方面提供了一个强有力的手段[6]。该技术能够强有力地抑制序列特异的目的基 因表达，抑制效率高，操作简便、迅速，耗费的精力和财力较小，而且可以获得遗传上稳定的突变体[7]。 为了迸一步研究PhrIPl基因在植物细胞板形成过程中的功能，本研究构建了PhrIPl基因在植物中 进行遗传转化及进一步研究该基因在植物细胞板形成中的分子作用机理莫定了基础。 1材料与方法 1．1材料与试剂 (1)转化植物、菌种及质粒拟南芥(Arabidopsis 35S 000 Pro．，GUS bp)； gene，13 Pro．，GFP 000 inBacteria,KanRin pMON30060(AmpR，35S一35Sgene，5 bp)；pMONl8342(SpecR Plant，7215 35S bp)均为华中农业大学农业微生物学国家重点实验室保存；Hellsgate2(SpecR，CaMV Pro．，18691 [收稿日期lz007一05—28 0548525) [基金项目]国家自然科学基金项目；美国国家科学基金项目(NSF-MCB [第一作者简介】马立安(1964一)。女．湖北洪湖市人．理学博士。副教授．主要从事植物与微生物分子生物学研究． h龃u．edu．∞． [通讯作者]张忠明，E-mail：zrnzhan8国maiL 万方数据 ·74·