从噬菌体7肽库中筛选哇巴因特异性结合的短肽.pdfVIP

药 　物 　生 　物 　技 　术 104 Phar maceutical Biot echnolo gy 　2008 ,15 (2) :104～108 从噬菌体 7 肽库中筛选哇巴因特异性结合的短肽 徐忠伟 , 徐瑞成 , 陈小义 , 刘英富 ( 中国人民武装警察部队医学院细胞生物学教研室 , 天津 300 162) 摘 　要 　以哇巴因为靶分子 ,从噬菌体 7 肽库中筛选与哇巴因特异性结合的短肽 。经过 3 轮淘筛并通过 EL ISA 法鉴定 ,获得 14 个阳性克隆 ,通过对噬菌体 ssDN A 电泳鉴定和序列分析筛选得到 3 种短肽 :肽 A 、B 和 C ( ) ( ) ( ) 的筛选一致率分别为 64 . 3 % 9/ 14 ,28. 6 % 4/ 14 和 7 . 14 % 1/ 14 。Genbank 中蛋白质同源性分析显示 ,肽 A 、 B 、C 均不与钠泵蛋白同源 。放射性配基受体结合法检测结果表明 ,合成的肽 A 能够与哇巴因结合 。哇巴因特 异性结合短肽的获得将为阻遏内源性哇巴因与钠泵的结合 、防治高血压奠定基础 。 关键词 　哇巴因;噬菌体展示肽库 ;筛选 中图分类号 :Q514 + ·3 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :100589 15 (2008) 020 10405 　　早先人们从动 、植物中得到洋地黄类物质如哇 结合 的噬菌体 。加 入 0 . 2 mol/ L GlycineH Cl ( ) ( ) 巴因 Ouabain 、地高辛和蟾毒素等天然钠泵抑制 p H2 . 2 ,1 mg/ ml B SA 分离已结合的分子 :温和 剂 ,后来在人体内亦检测到此类物质 ,属于一类新 摇动 10 min ,洗脱液吸入另一干净微量离心管 [ 1 ] μ ( ) 的肾上腺皮质激素 。近年来研究发现 ,在原发性 中。然后再用 15 l 1 mol/ L Tri sH Cl p H 9 . 1 中 ( 高血压 患者循环 中内源性哇 巴因 En do genou s 和上述 洗 脱 液 , 收集 洗 脱 液 。将 洗 脱 液 加 入 ) ( ) Ouabain , EO 水平显著升高 ,用抗 EO 抗体或阻断 ER2 738 培养物 已达对数生长期 中 ,37 ℃,孵育 EO 与钠泵特异性结合的方法可以使高血压动物 4 . 5 h 。将培养物 4 ℃, 10 000 r/ min 离心 10 min ; 模型的血压降至正常水平[2 ] ,各种不同的噬菌体肽 将上清液移入干净离心管中再离心 ,将沉淀物用 [3 ] μ 库成为寻找哇巴因结合肽的源泉 。本研究从噬 200 l TB S 溶解 。重复以上操作 3 次 ,即可获得高 菌体 7 肽库中筛选与哇