分子信标技术在基础医学中的应用.pdfVIP

中国试剂网 2.4.3 分子信标技术在基础医学中的应用 分子信标技术最初被用作PCR 的荧光探针，它既可以对扩增产物进行定量检测， 又可以对扩增过程进行实时的检测。近年来，随着分子信标技术的发展和成熟， 人们不断开拓其应用领域，目前，分子信标不仅可以用于基因的定量、定性检测， 还可以用于基因点突变等的分析，将分子信标与PNA-DNA-环技术结合，使检测 双链DNA 成为可能。另外，分子信标技术还为研究DNA-蛋白质之间的相互作 用提供了一种简单、直接、灵敏、实时、甚至可以用于活体检测的方法。利用分 子信标技术在分析、检测核酸和蛋白质中的优点，分子信标技术还可以作为生物 芯片和生物传感器的探针。总之，分子信标技术已经广泛的应用在基础医学研究 中的众多领域。 4.1 实时定量PCR 测定靶标浓度 分子信标技术在其出现之初就被用于实时定量PCR 测定靶标浓度。这一技术是 基于荧光信号积累实时检测整个PCR 进程。它是在常规的PCR 的基础上加入相 应的分子信标，在PCR 的每一循环过程中，都会发生分子信标与扩增产物结合， 从而产生荧光，但这并不影响PCR 的整个过程。并且只有能和分子信标结合的 DNA 模板得到扩增时才能产生荧光信号。所以荧光强度与特异性扩增产物的量 成正比，它是模板被PCR 扩增的直接标志。与常规的核酸检测方法相比，分子 信标可以进行闭管操作，有效消除核酸的交叉污染，具有实时、定量、高灵敏度、 高特异性等特点。 4.2 用于活体内核酸的动态检测 通过将分子信标注入活细胞内，使分子信标与特定的模板结合产生荧光。可以通 过荧光显微镜实时、动态的检测整个过程。如可以用于细胞内mRNA 的动态检 测，以了解其在转录等过程中的变化。但活体内存在大量的酶，其中某些酶可能 导致分子信标水解，使其结构破坏产生荧光，出现假阳性结果。PNA 分子信标 可以很好的解决这一问题，PNA 分子信标可以有效的避免核酶的水解，使荧光 中国试剂网 2.4.3 强度能准确反映活体内的过程。 4.3 用于双链DNA 的检测 与RNA 不同，DNA 是双螺旋结构，常规方法难以进行检测。而分子信标技术可 用于双链DNA 分子的检测。PNA 与双链DNA 互补链结合时可以取代非互补链， 使其解离成单链，形成P 环结构。解离后的DNA 双链及可用分子信标技术检测， 使分子信标与DNA 变性部分结合，从而出现荧光。 4.4 用于蛋白质的检测 随着基因组学的发展，出现了蛋白质组学，人们越来越发现许多问题要到蛋白质 中去寻找答案。这就要求人们能够对蛋白质各方面的性质可以加以检测。此外， 人们把蛋白质和核酸联系起来，研究蛋白质和核酸之间的相互作用，这一课题已 成为现代分子生物学的研究热点之一。与传统的蛋白质研究方法（如 X 单晶衍 射、圆二色谱等技术）相比，分子信标技术具有简单、灵敏的特点，又可以实现 实时检测，甚至可以用于活体检测。 2001 年，Tan 等发表文章阐述了其应用分子信标技术研究蛋白质所取得的结果。 他们用分子信标来检测单链结合蛋白，实验发现，分子信标产生的荧光。所产生 的荧光强度较分子信标与核酸结合时产生的荧光强度小，但其强度远远大于分子 信标与核酸发生错配时产生的荧光强度。同时他们还发现分子信标不能与双链结 合蛋白结合，产生荧光。 Nobuko Hamaguchi 根据分子信标的原理设计了Aptamer 信标，可以直接用来检 测蛋白质。这一方法与传统的酶联免疫吸附法测定蛋白质相比，具有简单、灵敏 等优点。但这一方法不能用于检测非特异性ssDNA 结合蛋白，而且分子信标的 构象受金属离子影响很大，一些金属离子的存在会干扰荧光信号的观测。