一株土壤炭疽杆菌的分离培养及理化特性鉴定.pdfVIP

广西农业科学2002年第4朝 一株土壤炭疽杆菌的分离培养及理化特性鉴定 磨龙春郭建刚 黄 夏 刘杰标 韦庄备周立平周善强 (广西区兽医防硷站南宁530001) ‘厂西河池地区兽医站’ 告敬 B 炭疽病足人畜共患的急性传染病之一。广西最 兰氏染色高倍镜下观察细菌形态。 早有文献记载炭疽流行是1932年，家畜炭疽发病住 荚膜染色；取24～36n,j-死亡小白鼠肝、8午涂 1949年前已有明确记录。炭疽杆菌在接触空气后能片，经多色美兰染色，高倍镜下观察荚膜形态。 形成抵抗力很强的芽胞，可在被污染的土壤巾存活 串珠试验：将待检菌株接种J：2毫升营养肉汤 数十年．因而土壤是传播炭疽的丰要因素。炭疽杆菌 巾．37℃培养18小时，取出按2单位／毫升加入青霉 的分离培养在临床诊断、防疫检验等方面非常重要。 素混合均匀，再置37C培养4小时后涂片，革兰氏 在未经使用抗菌素治疗的病死畜上易分离到炭疽杆 染色，用高倍镜观察菌体。 菌，但在污染严重的土壤中则很难分离到炭疽杆菌， 动力试验：取待检菌株穿刺接种半固体培养基， 37C培养72小时后观察结果。 最敏感的分离方法仍是一个世纪前Pasteur应用的 方法。根据此法，我们从天峨县一炭疽疫点污染的土 生化试验：取待检菌株接种生化微量鉴定管，置 壤材料中分离到一株炭疽杆菌．并对分离到的菌株 37‘c培养24小时后观察结果。 进行了理化挣陆豁定。现报告如下： 青霉素抑菌试验：用青霉素药敏试纸贴于涂布 有待检菌的琼脂平板表面，将平板置37C培养8小 1材料与方法 时，观察结果。 1．1待检样品 Ascoli氏沉淀试验：取24～36小时死亡小白鼠 从天峨县炭疽疫点一病死马剖杀地，分四个采 肝、脾剪碎加5倍生理盐水，在i00C水浴中煮沸30 样点各取10厘米深的表层土壤一份，合计4份。 分钟，用滤纸反复过滤，直至滤液透明。将滤液用毛 1．2分离方法 细吸管重叠在小试管中的炭疽沉淀索血清上，两层 制备土壤混悬培养液。称取土洋100克放入装 间不能有气泡，同时用标准炭疽})c淀抗原及生理盐 有玻璃珠的三角瓶中，加入2倍的灭菌肉汤培养液。 水作对照，置室温静置3～5分钟后观察。 振摇约20分钟，使土壤与肉汤充分混合后，置37C 药敏试验：用常规药敏纸片法，用青霉素、氨苄 恒温箱中培养244,D,t后待用。 青霉素、丁胺卡那、庆大霉素、磺胺甲基异恶唑进行 动物接种。取经37c培养24小时的土壤混悬 药敏试验。 液氍65’C水浴中加热30分钟，杀死非芽胞菌，然后 2结果 给小白鼠腹部皮下接种0．5毫升／只。 对位硝基苯甘油培养基培养。取接种土壤混悬 2．1培养特性 液后36～-72小时死亡小白鼠的肝、脾接种对位硝基 肉汤培养基培养．呈絮状沉淀，肉汤透明清亮， 苯甘油培养基，罱37c恒温箱中培养24小时。 不形成菌膜和壁环。 C 琼脂培养綦培养，菌体生长良好．菌落呈慧星状 接种肉汤、普通琼脂、血平板培养基：从经37 培养24小时的对位硝基苯甘油培养基上，挑取具 有小尾突起、扁平、表面粗糙、呈灰白色、干燥、边缘 有特殊形态的单个菌落分别接种肉汤、普通琼脂、血 不整齐。在低倍镜下