枸杞多糖提取及分离技术研究.pdfVIP

66 宁夏农林科技 ，NingxiaJournalofagri．andFores．Sci．Tech．2011，52(05)：66，89 枸杞多糖提取及分离技术研究 苟春林 ，苟金萍，张 艳 - 7夏农林科学院农产品质量监测中心，-7夏 银川 750002 摘 要：枸杞干果用氯仿 一甲醇(2：1)脱脂、水提、醇沉、乙醇一丙酮洗涤干燥、双氧水脱色、savage法除蛋 白、DEAE一32纤 维素分离、SephacrylS-300葡聚糖凝胶纯化，提取符合枸杞 多糖高效液相色谱指纹图谱仪器奈件要求的多糖制品，并且建立 枸杞多糖高效液相色谱化学指纹图谱分析的样品预处理技术系统。 关键词 ：枸杞 ；枸杞多糖 ；提取技术 ；分离技术 中图分类号：R284．2 文献标识码：A 文章编号：1002—204X(20II)05—0066—01 枸杞系落叶灌木，果实枸杞子味甘 、性平，有滋肾补髓 、养 直到无白色絮状沉淀出现。将除完蛋白的多糖溶液浓缩后，转 肝明目和祛风的作用，为一传统滋补中药。近几十年来，许多学 移到分子排阻为 8000～10000Da的透析袋中，流水透析 24h 者对枸杞进行了深入的研究，发现它在调节免疫、抗衰老、抗肿 后 ，蒸馏水透析过夜，溶液颜色变淡，浓缩透析后的多糖溶液。 瘤、降低血脂和血糖等方面表现出广阔的应用前景㈣，对枸杞 2．3 多糖分离、纯化 子的化学成分及其药理也进行 了大量的研究 ，发现枸杞子含 取30gDEAE一32纤维素经氢氧化钠一盐酸一氢氧化钠预 有丰富的氨基酸、无机盐、微量元素和维生素。大量研究表明， 处理后，加一倍量的蒸馏水，减压抽气 30min，除去溶液内的气 枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysacchande)是其主要的保健功 泡，一次性缓缓加入层析柱 (60x2C1TIi．d．)中，加蒸馏水平衡， 能因子，目前提取枸杞多糖多采用热水浸提与水溶醇沉法。 保持流速 1滴 ／5s，最终平衡柱床为45X2em。小心上样 ，蒸馏 枸杞多糖高效液相色谱指纹图谱研究的样品预处理极为 水、氯化钠溶液梯度洗脱。用 400mL蒸馏水和不同浓度梯度的 关键，从枸杞多糖的提取分离技术方面研究 ，提取到符合枸杞 O．O5、0．1、0．2、0．5mol／L氯化钠溶液洗脱，每瓶 12mL收集洗脱 多糖高效液相色谱指纹图谱仪器条件要求的多糖制品，并且建 液，用苯酚一硫酸法在490nm处测定其吸收值，做出洗脱曲 立枸杞多糖高效液相色谱化学指纹图谱分析的样品预处理技 线，合并高峰部位 ，浓缩得半纯品。 术系统。 将 SephaerylS-300葡聚糖凝胶用蒸馏水浸泡洗涤多次 1 枸杞多糖提取 后，抽气除去凝胶中气泡 ，搅匀后一次性连续匀速加人层析柱 1．1 枸杞多糖提取溶剂、条件选择 (100X1．6cmi．d．)中，用蒸馏水平衡 24h后将枸杞多糖的半纯 分别称取枸杞样品8Og，以石油醚 、氯仿一甲醇 (2：1)为 品小心上样，蒸馏水洗脱，自动部分收集器分部收集洗脱液，15 提取溶剂，经不同提取时间回流脱脂近无色，挥干溶剂 以后将 rain一管，HPLC隔管进样 ，寻找单峰样品。 脱脂后的构杞样品放入烧杯中，分 3次加 15、l2、1O倍量的蒸 粗多糖经 DEAE一32纤维素 、Sephaery|S-300葡聚糖凝 馏水于9Ooc水浴提取 ，每次2h；收集 3次的滤液减压浓缩至 胶柱分离纯化得到纯品LBP—I(淡黄色固体 )、LBP—lI(白色 约 200mL，转移到大烧杯中，加4倍量的95％乙醇 ，沉淀 12h 絮状固体)、LBP一11／(白色絮状固体)、LBP-Ⅳ (白色絮状固 后抽滤 ，并依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，干燥后便得 体)；其中LB Ⅱ、LBP一Ⅲ部分含量较高 ，可以作为今后研究 到枸