水稻单粒种子DNA提取及SSR-PCR反应体系的正交设计优化.pdfVIP

· 种子科技 · ·2011(06)· ·实验研究 · 文章编号：1005—2690(2011)06—0020—04 中图分类号 ：S511．037 文献标志码 ：A 水稻单粒种子 DNA提取及 SSR—PCR 反应体系的正交设计优化 李炫丽，王世才，许双全 (湖北省种子集团有限公司禾盛生物育种研究院，武汉 430070) 摘 要：本文以水稻单粒干种子为材料进行DNA提取方法和SSR—PCR反应体系的优化研究，结果表明：用CTAB法提取 的水稻干种子DNA较为完整，降解量少，可获得理想的扩增效果。在试验设计范围内，确定的最佳反应体系为20 L，其中 含模板 DNA45ng，dNTPs浓度为 0．15mmol／L，引物浓度为 0．4 mol／L，M 浓度为 1．5mmol／L，Taq酶为 1．6U。 关键词 ：水稻 ；种子 ；CTAB法 ；SDS法 ；SSR-PCP．体系优化 我国是世界上第一个在生产上利用水稻杂种优势 在指纹图谱构建、遗传多样性分析等方面有着广泛的 的国家，杂交水稻的推广对大幅度提高水稻单产起了 应用 l【l，在生产指导中常用于杂交水稻品种真实性和 巨大作用。但是，由于种子质量问题给农户造成严重 纯度鉴定 。 减产的事件时有发生 。因此，种子质量 (主要是真实性 在杂交水稻纯度鉴定和真实性鉴定过程 中，大多 和纯度)控制显得尤为重要。如何能更快更有效地鉴 数工作人员常选取幼小植株或幼嫩叶片为材料进行植 定和检验杂交水稻种子纯度和品种真实性，已成为种 物基 因组提取 ，这种方法不仅费时(种子发芽一般需要 子生产和销售中亟待解决的问题之一。 4～6天)，且步骤繁琐，很难适应如今种子贸易的快节 SSR(SimpleSequenceRepeats)标记 是指 以2～6 奏。为了缩短检测时间，提高工作效率 ，最好选择干种 个碱基为重复单位组成的长达几十个核苷酸的串联重 子进行基因组DNA的提取。匡猛等2[1以棉种为材料 ， 复序列，广泛分布于水稻基因组中。由于 SSR分子标 探索出一种适合棉花品种 SSR分析的DNA快速提取 记具有分布广泛、共显性遗传、结果稳定性高等优点， 方法；McDonald等 [31从玉米、棉花、小麦及三叶草的干 违法活动，以以上三种形式给农业生产造成危害。针对 伍建设 ，采取查堵结合的措施，严查狠打，从重处罚 ，争 目前调查中发现的问题，我们做了细致的研究和分析， 取把违规种子在流通过程中即拖垮打净，阻断供货渠 寻找解决问题的办法，认为应该从 以下几方面入手 ，政 道 。 策疏导、发动群众、严格执法，以打击违法为主，辅以扩 2．3 改革品种审定办法，细分准入市场范围 大宣传、引领品种更新，着力痛打 “未审先推”行为，进 在保证不改变科学严谨 的品种审定原则的前提 一 步净化市场 ，真正让农 民买着放心、种着安心，还市 下 ，对种子市场按生态条件和区域规划进行适当细分 ， 场一个稳定 ，还社会一个和谐。 增加区试点数 ，在品种适宜种植 区域方面灵活掌握 ，把 2．1 扩大普法宣传 断送 “未审先推” “未审先推”问题特别严重的品种作为重点考察对象， 加大 《种子法》及相关条文的宣传力度 ，让广大种 以便做 出更加科学合理的决策 。从另一种意义上考虑， 植户真正能懂法，会用法。无论何种意义上的 “未审先 这也不失是一种进一步繁荣市场 ，挖掘品种潜力 ，改善 推”，最终受到影响的是农业生产 ，受遭损失最大 的是 市场秩序 ，减少违法经营，降低执法工作强度的有效途 农民，而 “未审先推”之所以存在 ，正是 由于农 民法律意 径 。 识淡薄 ，没有认识