抑制差减杂交克隆肺泡发育上游调节基因.pdf

第39卷第6期 分子细胞生物学报 V01．39．No．6 2006年12月 JoumalofMolecularCeU December2006 Biology 抑制差减杂交克隆肺泡发育上游调节基因 赵立青1“ ThiennuH．Vu2 (1南开大学生命科学学院生物化学与分子生物学系，天津300193； 2加州大学旧金山分校(UCSF)医学系肺生物学研究中心，美国CA94110) 摘要肺泡是肺进行气体交换的基本功能单位，但对其发生、发育及调节机制的认识还十分有限。 为克隆调节肺泡发生的新基因，我们利用抑制差减杂交技术，以与肺泡发生密切相关的原始肺泡期 和肺泡期的小鼠肺为材料．分别相对于肺泡成熟期鼠肺组织构建了两个抑制差减杂交eDNA文库． 从中筛选出118个肺泡发生的上游因子。这些基因涉及机体生长发育过程及其调节的多个方面。如 可增加内皮细胞渗透性而参与肺血管系统的发生和重建的瞬时受体蛋白(TRPc4)，通过刺激平滑 时特异表达于原始肺泡期和肺泡期而引起我们的注意。实时PCR进一步显示，P311表达于肺发育 的全过程．但表达高峰仅出现于肺泡发育相关阶段，而在成熟肺组织中降至最低点。提示P311可能 与肺泡形成密切相关。 P311 TRPC4 关键词：肺泡发育 抑制差减杂交 Lgalsl 肺泡是肺组织进行气体交换的基本功能单位， 本研究的目的在于从肺组织中分离新的肺泡 肺泡的形成极大地增加了肺组织进行气体交换的 发生调节基因，以期为阐释肺泡发育机制、了解相 表面积，足以应对生物体各种生命活动对氧的需 关疾病的病理过程、建立相应的治疗手段提供依 求。新生儿呼吸窘迫、围产期死亡、及一些长期肺部 据。由于肺泡的发生出现在肺组织形成的特定时 疾患皆由如肺泡毛细血管发育不良、支气管肺发育 期．调节肺泡发育的各种激活或抑制因子必特异性 不良、终末导管发育不良等肺泡发育异常导致。此 地高水平表达于这些时期。肺组织发育过程中。有 外．由于长期吸烟或处于污浊环境下生活所导致的 两个阶段与肺泡的形成关系最为密切。一个是原始 慢性阻塞性肺病(COPD)，在全球疾病死亡原因当 中。仅次于心脏病、脑血管病和急性肺部感染，与艾 出现记做E0．5)，至出生后第五天，P5]，因为原始肺 滋病一起并列第4位。预计到2020年，COPD所造泡是肺泡的前体；另一个是原始肺泡被进一步分 成的疾病经济负担将在各种疾病中排到第五位。 隔、重建，形成仅含单层毛细血管网之薄壁囊泡结 COPD的直接病理变化就是肺泡损伤。目前对这些构的肺泡期(小鼠P5至P14)‘引。为克隆肺泡发育的 疾病尚无有效的临床治疗方法。 利用基因打靶研究已发现了一些影响肺泡形 Substmctive 段的小鼠肺为材料，构建了原始肺泡期(E18．5)和 成的基因。如：促肾上腺皮质激素释放激素(cRH)‘-] 或转化生长因子p3(TGF—B3)[：]的功能缺失将导致 非正常的厚壁原始肺泡，表皮生长因子受体(EGFR)例 的功能缺失则减少原始肺泡的形成：而血小板衍生 生长因子A(PDGF—A)‘引、成纤维细胞生长因子受体 ’MarchofDimesResearchFoundation资助项目 (grant牺一 (FGFR)[s]的功能缺失将不产生成熟的肺泡。尽管如