拉米夫定与牛血清白蛋白的作用机制.pdf

2007年7月 浙江教育学院学报 July姗 第4期 OFZHKIIANGEDUCATIONINSTITUTE No．4 JOURN^L 拉米夫定与牛血清白蛋白的作用机制 邵爽，钱欢欢，沈小赞，许晓丽，王 嵩 (浙江教育学院理工学院，浙扛抗州310012) 摘要：用荧光和紫外光谱法研究强8．HCl缓冲溶液中拉朱夫定与牛血清白蛋 白(BSA)作用机制．测定了不同温度下拉米夫定对BSA的荧光猝灭光谱，并对其猝灭 机制进行了讨论，认为拉米夫定对BSA的猝灭为静态猝灭；运用位点结合模型，计算 x 得到298K时拉米夫定与BSA结合常数E为1．79lO*L·mol“和结合住点数n为 1．04，说明二者存在一定相互作用，其作用力主要为氢键或范德华力；根据F6ster偶 极．偶极非辐射能量转移原理，求得拉束夫定在BSA上距色氨酸残基的距离r为 2．21nm；最后通过同步荧光光谱发现拉米夫定对BSA构象产生了一定的影响． 关键词：紫外光谱；荧光光谱；拉米夫定；牛血清白蛋白；荧光猝灭 拉米夫定(Lamivudine，LMVD，分子结构示于凰1)是新一代核苷类 抗病毒药，最早被开发用于治疗艾滋病．其主要作用在于对逆转录酶 活性产生强烈抑制，药物在进人细胞经磷酸化后与脱氧胞嘧啶核苷 NI少 O 发√ (dCTP)竞争，掺人合成的DNA链中，使其不能继续延伸而终止复制。 而且使新的病毒颗粒不能组装，阻断病毒在体内的循环感染．此外，拉 米夫定还是目前临床治疗乙肝的最有效药物之一川。它具有抑制乙型 肝炎病毒(HBV)逆转录酶的作用，进入肝细胞内形成三磷酸衍生物， 田1拉来夫定分子绔陶作用于HBV聚合酶，阻止HBV．DNA的合成，从而可以减少体内的病 毒含量，促使HBeAg，抗．HBe血清转换，同时改善肝坏死和肝硬化的作用． 作为系列研究工作【2-51的一部分，本文用紫外和荧光分析法研究在模拟人体生理pH值 条件下拉米夫定与BSA之问的作用，测定其作用的结合常数、结合位点数及热力学参数，考察 拉米夫定对BSA构象的影响，为阐明药物的作用机制、药物的毒性及药物合成、临床用药提供 了有益参考，同时为生命科学研究提供了有用的信息和数据． 1实验部分 收稿日期：2007—06—03 基盒璃目：浙江省白然科学基盒资助项目(M∞31蝤) 作者简介：邵裹(1962一)，男。浙江富用人，浙江教育学院理工学院化学系教授，理学博士；钱欢敢(19S5一)．女，浙江长兴 人．浙江教育学院理工学院化学专业2003级本科班学生；沈小蒉(1985．)．女，颔江兰馔人，浙江教育学院理工学院化学专生 2003级本科班学生． 万方数据 第4期 碎克．钱疵欢。沈，J’量，许竞i，王嵩：扛耒夫定与牛血清白蛋白的作用机制 5l 1．1饭嚣 TOLEDO)． 20-200pL；AB265．S电子分析天平(M瑚：rER 1．2试荆及配制 拉米夫定(原料药)由杭州科率药业有限公司提供(质量符合USP29标准)；牛血清白蛋白 (BSA)购于上海伯奥生物科技有限公司，氮古量大于等于13．5％；三羟基氨基甲烷(“B)。HCI (浓度为35％一38％)，及其它试剂均为分析纯，实验用水为UPWS超纯水器处理的二次超纯 永． 100md·L“的溶液备用． 1．3实验方法 在10ml容量瓶中，依次加人一定量拉米夫定，BSA储备液，用Tris．HCI缓冲溶液稀释至刻 度，混匀后恒温至一定温度，分别测定其荧光