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第27卷第4期 齐 齐 哈 尔 大 学 学 报 Vo1．27．No．4 2011年 7月 JournalofQiqiharUniversity July，201l HPLC手性流动相添加剂法拆分巴氯芬对映体 卢建国 ，王立艳 ，苏立强 (1．黑龙江农垦职业学院，哈尔滨 150025；2．齐齐哈尔大学 化学与化学工程学院，黑龙汀 齐齐哈尔 161006) 摘要：建立了以羧甲基一 一环糊精为手性流动相添加剂，在反相液谱条件下拆分巴氯芬对映体的方法。研究了手 性添加剂的种类及浓度、流动相组成 、pH值及流速等 崇对拆分的影响。流动千H为甲醇、乙腈 、水 ，体积比为 90：5：5，其中含2．00g／LCM一口一CD，pH值595，流速060mldmin，检测波长231nm，分离度为 1．31。该方法 简便、快速、相对偏差小。 关键词：羧甲基一B一环糊精；流动相添加剂；高效液相色谱法；巴氯芬；对映体 中图分类号：0657．72 文献标识码：A 文章编号：1007—984X(2011)04—0060—03 巴氯芬 (化学名 一4一氯一 一氨基丁酸 )是应用于临床的选择性 GABA 2 受体激动剂，其化学结构见图 l。目前，临床使用的仍是巴氯芬外消旋体。 COOH 据文献报道 R(一)一巴氯芬的生理活性是s(+)一巴氯芬的100倍 “。现有拆分 方法有毛细管电泳法 、柱前衍生化法 和手性固定相法㈣，但用 HPLC手性 cI 流动相添加剂法拆分巴氯芬对映体还未见报道。 图I巴氯芬的结构 本文以羧甲基一 一环糊精 (CM一 一CD)为手性流动相添加剂，拆分巴氯芬对映体。在优化条件下， 对映体分离度达 1．3，此法无需昂贵的手性柱，也无需繁琐的柱前衍生化，方法简便快速，相对标准偏差小。 1 实验部分 1．1 仪器与试剂 高效液相色谱 (HPLC)系统 (大连依利特分析仪器有限公司)：P200lI高压恒流泵、UV200Ⅱ紫外可 变波长检测器、Eehrom98色谱工作站；AS3120超声波清洗器 (天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。 甲醇、乙腈 (色谱纯，天津市科密欧化学试剂开发中心)； 一环糊精 ( 一CD，中国医药集团上海化 学试剂公司)；羧甲基一 一环糊精 (实验室 自己合成)；巴氯芬原料药 (武汉祥和精细化工有限公司)。 1．2 羧甲基一 一环糊精的制备 参照文献 5【1的方法合成羧甲基一 一环糊精 ，并进行红外表征和取代度的 4定。 1．3 色谱条件 色谱分离柱：ODSHypersil(4．6ITlm×200mHl，5pro，大连依利特公司)；流动相：甲醇、乙腈、水体 积比为90：5：5(2．00g／LCM～ 一CD)pH=5．95；流速0．60mL ·rain～；紫外检测波长231nm。 1．4 实验方法 准确称取巴氯芬O．OlO0g，置于 10mL容量瓶中，加入少量三乙胺，超声溶解并稀释至刻度，进样前 经0．45~tm微孔滤膜过滤。在 1．3条件下进行巴氯芬对映体的拆分。 2 结果与讨论 2．1 羧甲基一 一环糊精的红外表征 对合成的CM一 一CD进行红外表征，CM一 一CD的IR谱图中新增了l417，1602，1335cm 的醚键 吸收峰，证明有羧甲基的存在，与文献结论一致 。经测定平均取代度为0．85。 收稿Et期 ：2011-03—25 作者简介 ：卢建国 (1957一)，男，河南新野人，副教授，主要从事食品化学教学与研究工作，slq202@163om。 第 4期 HPLC手性流动相添加剂法拆分巴氯芬对映体 2．2 手性添加剂的选择 考察以 一CD 、CM— —CD作添加剂对巴氯芬对映体拆分的情况 (见图2)。巴氯芬对映体在 一CD 体系中不能分离，在CM一／3一CD体系中达到良好分离。可能是由于 一cD在普通溶剂中溶解度小，改性后 CM一 一CD溶解度增加，利于选择性的提高；其次，羧甲基化后环糊精空