时间分辨荧光分析技术在环境病源微生物检测中的应用.pdfVIP

芬兰的Soini和Hemmil￡i在总结自己和前人T作的的感染剂量为10～100个细胞)而需要对大量环境水 000～10 基础上，提出了“时间分辨荧光免疫分析理论”。1983 进行浓缩(1 000倍)，这就造成浓缩后的环 年Hemmil￡i、Soini和Ltivgren等报道了以镧系配合境水中包含了大量带有强自发荧光的藻类、有机碎 物作为标记物的时间分辨荧光免疫分析技术的应 片和矿物粒子，它们会对蓝氏贾第鞭毛虫的免疫 用。时问分辨荧光免疫分析技术是在荧光免疫分析 荧光成像检测产生严重干扰。隐孢子虫为体积微 技术基础上发展起来的一种新型免疫分析技术，其 小的球虫类寄生虫，广泛存在于多种脊椎动物体 原理和方法与常规的荧光免疫分析法不同。它采用 内，寄生于人和大多数哺乳动物的主要为微小隐 长寿命荧光的稀土配合物作为标记物进行抗原或抗 孢子虫，由微小隐孢子虫引起的疾病称隐孢子虫 体的标记，在荧光激发后引入一个适当的延迟时间， 病，隐孢子虫是导致人类及幼畜腹泻的主要肠道 然后再采集稀土荧光配合物的长寿命荧光信号，从 病原体之一。 而有效地克服短寿命的背景荧光和散乱光对测定的 3．2时间分辨荧光分析技术在病源微生物检测中 干扰，使非特异性本底信号降低到可以忽略的程度， 的应用 达到了极高的信噪比。该方法具有标记物稳定、有效 2004年，Piper等报道了利用时间分辨荧光显 期长、标准曲线量程宽、不污染环境、应用范围广、操 微镜成像技术检测浓缩水样中的病源微生物 作流程短等许多优点，其最小检出下限可达10。18～ 10‘19 mol／L，远远超过RIA，EIA，甚至是CLIA方法。 所以TRFIA技术虽然问世时间短，但是近20a来发 羊抗鼠二次抗体，然后分别与浓缩水样中的Cryp— 展却十分迅速，在生命科学研究中具有重要意义，成 为目前超微量生物物质分析中最有发展前途的技术 育，最后进行时间分辨荧光成像检测。结果显示水 之一。 样中杂质的强背景荧光被完全消除，检测信噪比 增强了10倍。 3荧光探针在时间分辨荧光生化分析中的 应用 4结语 3．1 荧光探针在时间分辨荧光显微镜生物成像技 随着具有更优异荧光性能如高量子产率、可见 术中的应用 光激发和良好细胞通透|生等的长寿命稀土荧光标记 铽配合物用于时间分辨荧光显微镜成像测定也 物被开发出来，同时时间分辨荧光测定技术可简单 有报道，Saavedra等合成的一种可直接标记细胞的 消除样品中共存杂质的背景荧光干扰，预计其在 铽荧光配合物，其配位体是由3种化合物组成的结 复杂的易损伤活体生物样品时间分辨荧光成像测 合体，其中一部分用于环境水中病源微生物蓝氏贾 定领域具有很好的应用前景，同时对于低成本的 第鞭毛虫的检测，水生病原微生物蓝氏贾第鞭毛虫 可见光源激发时间分辨荧光生化分析仪器的研发 是人和动物体内的一种肠道寄生虫，在世界范围内 也具有很好的参考价值。相信时间分辨荧光显微 已经导致了多次肠道疾病的爆发。环境水中蓝氏贾 镜成像技术必将会在更为广泛的研究领域中得到 第鞭毛虫的检测由于其很低的感染剂量(导致发病 应用。 时间分辨荧光分析技术在环境病源微生物检测中的应用 作者： 付晓燕， 李秋波 作者单位： 大连市环境监测中心，辽宁大连116023 引用本文格式：付晓燕.李秋波 时间分辨荧光分析技术在环境病源微生物检测中的应用[会议论文] 2011