构建链霉菌小型基因文库的新型正选择克隆载体.pdfVIP

中国抗生素杂志2010年11月第35卷第11期 835 文章编号：1001—8689(2010)11-0835—05 构建链霉菌小型基因文库的新型正选择克隆载体 马超 朱宇鹏 尚广东 (江苏省微生物工程技术研究中心，江苏省生物多样性与生物技术重点实验室，南京师范大学生命科学学院，南京 210046) 摘要：目的 构建链霉菌小型基因文库是获得链霉菌基因的一个重要手段，常规使用的克隆载体常有着一定程度的假阳 性，因此构建的高效率的克隆载体有着实际的意义。方法 本研究通过重叠延~*PCR手段将一个96bp的多克隆位点序列插入 至rpsL基因的启动子和开放阅读框之间，将此DNA片段克隆~pBluescriptKS(一1而获得了新型的正选择克隆载体pLS975。结果 pLS975有18个酶切位点可用于外源DNA片段的克隆，重组克隆以氨苄青霉素抗性和链霉素抗性进行筛选，宿主菌为链霉素抗性 菌株~EscherichiacoliDH10B。两个小型基因文库的制备显示pLS975具有很高的克隆效率(96％～100％)。结论 pLS975可成为 构建链霉菌小型基因文库的良好载体。 关键词：正选择克隆载体；链霉菌：小型基因文库；rpsL基因：链霉素 中图分类号：O78 文献标识码：A PositiveselectionvectorforthepreparationofStrepWmycesgenomicmini·library M aChao，ZhuYu—PengandShangGuang—dong (JiangsuEngineeringandTechnologyResearchCenterforMicrobioloyg,JiangsuKeyLabofrBiodiversityandBiotechnology,Collegeof LifeSciences，NanjingNormalUniversity,Nnajing210046) Abstract 0bjective PreparationofaStreptomycesgenomicmini-libraryisanimportantstrategytoobtain Streptomycesgenes，normallyusedvectorssufferthedisadvantageofsomefalsepositivepercentage，soahigh efficientcloningvectorwouldbeofpracticalimportance．M ethods ThroughoverlapextensionPCR，a96bp multiplecloningsiteregionwasinsertedbetweenthepromoterandopenreadingflameofrpsLgene，theDNA fragmentwasclonedintopBluescriptKS(-)，obtaininganewpositiveselectionvectorpLS975．Results pLS975has eighteencloningsites，recombinantDNA isselectedbybothampicillinandstreptomycinselectioninastreptomycin resistanthoststrainsuchasEscherichiacoliDH10B．pLS975showedhighcloningefficiencies(96％-100％)inthe preparationoftwogenomicmini—libraries．Conclusion pLS975canbeagoodcloningvectorforthepreparationof Streptomycesgenomicmini—library． Keywords Positiveselectionvector；Streptomyces；Genomicmini—library；rpsLgene；Stre