山西地区6个猪种氟烷敏感基因的检测.pdfVIP

中国畜牧兽医 2011年第38卷第3期 生物技术 ·77· 山西地区6个猪种氟烷敏感基因的检测 贾静敏1。王效京2，陈易新1，杨晓奋1，高鹏飞1。郭晓红1，李步高1，曹果清1 (1．山西农业大学动物科技学院，山西太谷030801；2．山西省畜禽繁育工作站，山西太原030001) 烷敏感(Hal)基因检测。结果表明，在山西黑猪和马身猪中，只检测到氟烷敏感阴性纯合子(NN)；而在长白猪、大白猪、杜洛 种工作中，应加强对氟烷敏感基因的检测，选育抗应激群体。 关键词：猪；氟烷敏感基因；PCR-RFI。P 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1671-7236(2011)03—0077—03 氟烷敏感基因(Halothane 烷敏感基因检测，为提高其生产性能和生产优质猪 gene，HaZ)，由l对 等位基因HalN和H口Z”控制，N对n表现为显性，肉提供保证。 隐性纯合子表现为氟烷敏感性，它是猪产生应激综 1材料与方法 stress 1．1 材料482头试验猪种均来自山西省某种猪 合症(porcinesyndrome，PSS)和PSE(pale soft exudative，PSE)肉的主效基因。 场，包括大自猪54头、长白猪73头、杜洛克猪35 近年来研究结果表明，猪应激综合症是由定位 头、山西白猪249头、山西黑猪30头、马身猪41头。 于6p11-q21的兰尼定受体基因(Ruanodinerecep-在不影响猪耳号的地方，用耳号钳剪耳组织一小块 mL tor (约0．5 70％乙醇的1．5mL离 gene，RYRl)的突变所致，当该基因突变为隐性 g)，放于装有1 纯合子时，猪表现为应激敏感性。Fujii等克隆和测心管中，带回实验室，于一70℃保存备用。 1．2 方法 序了皮特兰猪(MH敏感)和大白猪(MH正常)的 1．2．1DNA的提取采用常规的酚／氯仿抽提法 RYRl全长cDNA序列，发现全序列共有18处碱基 提取基因组DNA。 发生了突变，唯有C1843突变为T1843导致受体蛋白第 1．2．2 引物设计与合成 所用引物参照耿忠诚等 615位的精氨酸(Arg)转变为半胱氨酸(Cys)，从而 确认了猪应激综合症的分子遗传基础。由于该基因 I或 7，下游引物 C1843一T1843突变改变了限制性内切酶Hha CfoI的识别位点，Otsu等(1992)建立了PCR— 3’，由大连宝生物公司合成。 RFLP技术检测氟烷敏感基因型(NN、Nn、nn)；该 方法简单易行，结果准确，被广泛应用于不同猪种氟 1．2．3PCR扩增对所有个体基因组DNA采用 烷敏感基因的检测中(方美英等，1999；刘卫东等，相同的反应体系进行PCR扩增，反应总体积为20 mmol／L) 2006；耿忠诚等，2005)。 肛L，包括10×Buffer2．0扯L，dNTPs(2．5 1．6 本研究拟采用PCR-RFLP技术对长白猪、大白pL，上、下游混合引物1 猪、杜洛克猪、山西白猪、