抗伪狂犬病毒Ea株单克隆抗体的制备及鉴定.pdfVIP

第24卷第3期 华中农业大学学报 V01．24No．3 of June2005，222～225 2005年6月 JoumalHuazhongAgriculturalUniversity 抗伪狂犬病毒Ea株单克隆抗体的制备及鉴定★ 汪招雄 何启盖一 黄红亮 刘正飞 陈焕春 (华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北省重点实验室，农业微生物学国家重点实验室，武汉430070) 摘要将伪狂犬病毒Ea株纯化后免疫雌性Balb／c小鼠，取其脾细胞与SP2／o的骨髓瘤细胞融合，用间接 反应；用单抗建立的夹心ELISA试验能检出伪狂犬病毒。表明本研究所获得的2株单抗是PRV特异性的。这 2株分泌抗PRv单抗的杂交瘤细胞株的获得为进一步建立准确快速的抗原检测方法奠定了基础。 关键词伪狂犬病毒Ea株；单克隆抗体；间接免疫荧光试验 813 中图法分类号S852．65；Q 研究室保存；检测时同时设立空白对照。 伪狂犬病毒(pseudorabiesvirus，PRV)是引起 多种家畜和野生动物发生伪狂犬病的病原体[1]。该1．2试验动物 病毒的天然宿主为猪，它能够引起妊娠母猪发生流 5至8周龄Balb／c雌性小鼠购自湖北省预防医 产，产死胎、木乃伊胎；成年猪呈隐性神经症状，但病 学科学院。 毒潜伏期较长；对初生仔猪主要引起神经症状，出现 1．3主要试剂配制方法 I羽Ⅵ11640基本培养基：称取10．4 麻痹，运动失调，衰竭，15日龄内仔猪死亡率更是达 g舢1640 粉剂，NaHC031．8g，溶于950mI。三蒸水中，待完 100％。由于该病分布范围广泛，危害严重，给全球 全溶解后通入Co：直到溶液变为橙色，然后加水定 养猪业造成巨大的经济损失[2’3]。为了检测该病， 容至1000mI。，过滤除菌，分装保存备用。 人们建立了EI。ISA、乳胶凝集PCR、免疫荧光等方 法[4~6]。而国内尚未见到有关PRV单抗应用方面 养基加人新生牛血清及青、链霉素。 MAb的 的报道，基于此目的，笔者开展了抗PRV 研究，并利用杂交瘤技术获得了2株分泌抗PRV单 1％100×HAT盐。 抗的杂交瘤细胞；这为进一步研究PRV基因的功 能以及建立快速、准确诊断PRV的方法奠定了基 l％100×HT盐。 础。 1．4抗原的制备 Ea株接种已长 1 材料与方法 PRV病毒繁殖及纯化：把PRV 满单层的IBR孓2细胞，37℃吸附1h，加入维持液， 1．1细胞系和毒株 待80％以上细胞出现CPE时收获病毒，反复冻融3 PRV(Ea株)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼 次后先差速离心，再在不连续蔗糖浓度梯度超速离 吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(HCV)、乙脑病