猪鼻软骨硫酸软骨素双酶法提取工艺研究.pdfVIP

2009 NO.19 科技创新导报 化学工业 猪鼻软骨硫酸软骨素双酶法提取工艺研究① 张武先 普晓兰* 王金华 罗兴桥 刘龙高 (云南昆明西南林学院 云南昆明 650224) 摘 要:以猪鼻软骨为原料,用双酶法提取硫酸软骨素。用酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、2号酶、脂肪 酶分别与胰酶组合提取硫酸软骨素,分析不同种类酶对硫酸软骨素提取的影响。通过正交试验得到的最佳提取工艺为:料液比1:1.5,第 1类酶使用碱性蛋白酶,用量为2.5%,第2类酶(胰酶)用量为1.2%,成品收率达到16.740%。 关键词:硫酸软骨素 双酶法 提取 分析 中图分类号:Q81 文献标识码:A 文章编号:1674-098X(2009)07(a)-0115-02 硫酸软骨素(chondroitin Sulfate,CS)是 0,酶活力200000u/g)、中性蛋白酶(最适 乙醇脱水2－3次,80℃恒温干燥至样品含 一种酸性粘多糖,易溶于水,不溶于乙醇、 pH 7.5,酶活力80000u/g)、木瓜蛋白酶(最 水率为 10%时得成品。 丙酮等有机溶剂,为白色粉末,无臭无味, 适pH6.5,酶活力60000～700000u/g)、脂肪 2.3双酶法主要影响因子正交试验 广泛分布于哺乳动物结缔组织,如各类软 酶(最适pH7.5,酶活力4000u/g)、2号酶(厂 为进一步优化生产工艺,以料液比、 骨,鼻骨、喉骨、气管,韧带、肌腱等,属于 家保密配方);第2类酶:精制复合胰酶(以 第1类酶种类、第1类酶用量、第2类酶用 糖氨聚糖(Glycosaminoglycans,GAGs)类物 下简称胰酶)(最适pH7.5,胰蛋白酶活力 量四个因子按2.2操作过程进行正交试验 [1] 4000u/g,胰淀粉酶活力20000u/g,胰脂酶 (L934)。双酶法影响因子及水平见表 1。 质 。根据硫酸软骨素的化学组成和结构 差异,又可将其分为A、B、C、D、E、F、 活力10000u/g)。酶由无锡市酶制剂厂生 2.4成品含量检测 [5] H等多种,一般含50～70个双糖基单位,分 产。 咔唑法 。 [2] 1.2主要仪器设备 子量通常在10000～30000之间 。 临床上,硫酸软骨素主要用于治疗神 CD－308型电动绞磨机(顺德市肯德 3结果与讨论 经痛、关节炎、耳鸣以及促进溃疡愈合和 利电器实业有限公司)、BS223S型电子天 3.1不同种类第1类酶对硫酸软骨素提取 防治高血脂症等。硫酸软骨素还具有抗凝 平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司)、 的影响 血和防止血管硬化等活性,对冠心病、心 DHG－9145A型电热鼓风干燥箱(上海一 硫酸软骨素提取方法有稀碱－酶解提 [6] [7] 肌梗塞等心血管病的防治有较好的疗效, 恒生物科技有限公司)、723型可见光分光 取法 、浓碱复合酶酶解提取法 ,以及双 [3] [3,4] 对神经细胞、肾细胞等具有保护作用 。在 光度计(上海光谱仪器有限公司)、HH6型 酶酶解法 等,成品收率各有高低,都是用 医药、食品、化妆品工业中具有广泛用途, 恒温水浴锅(金坛市杰瑞尔电器有限公司) 一种酶替换稀碱或浓碱完成实验,均未进 市场需求量很大。 等。 行用不同种类第 1类酶替换碱进行硫酸软 通