家兔精液品质评定方法de研究进展.pdfVIP

分析大量 的精子 ，但该方法耗资较高 ，限制 了其在生 常规染色方法有伊红、伊红一苯胺黑和中性红 3 产上 的应用。CASA是在光学技术 的基础上结合计算 种。伊红带有阴离子，能渗透到死精子内部与阳离子 机图像识别、运动 图像处理技术发展起来 的精子运动 结合而呈红色，活精子 因细胞膜完整而不能着色。中 能力的综合分析方法。这种方法不仅提高 了检测结果 性红为水溶性染料 ，能通过活精子的细胞膜储存于细 的客观性和快速性 ，还 引入直线运动速度 (VSL)，曲线 胞 内，使其着色 ，而死精子不着色。最后 ，通过统计染 运动速度(VCL)、平均路径速度(VAP)、运动的前向性 色精子数来评价精子活率。但是在常规染色过程 中， (STR)、直线性 (LIN)、摆动性 (WOB)和鞭打频率 精子容易受到损伤而死亡 ，使其活率低于实际值 。 (BCF)等传统检测方法不能提供的参数。准确的CASA 荧光染色技术按其染色作用机理分为两类 ：一类 分析结果能预测精子 的受精能力和人 -1-!暖精 的受胎 是染色剂进入死亡精子的受损质膜内部使其着色。溴 率。但是CASA分析样品的准确性受到诸多因素的影 化 乙锭 (EB)、溴 乙啶二聚体 (EH)、碘化丙锭 (PI)和 响，如精子浓度 、样品中细胞 的成分、非细胞颗粒 的干 Hoechst3258等都是死精子特异性的荧光探针。另一类 扰、测量中精液的流速和精子计数池 的型号等。 自动 、 是某些染色剂本身没有荧光性 ，却能进入活体精子细 快速分析精子质量是今后精子质量检测的重要发展 胞 内部 ，在各种非特异性酯酶的作用下转化为呈现绿 方向，因此建立一种标；隹条件 下的CASA分析方法是 色荧光的荧光物质 ，这些产物不能通过完整 的细胞质 非常有必要 的。 膜。羧基荧光素双醋酸盐(CFDA)、羧基二甲基荧光素 2 家兔精 子运动力 双醋酸盐 (CDMFDA)、钙黄素乙酰基 甲基酯(CAM)、 运动力保证精子在受精过程中与卵子相遇 ，并完 Hoechst33342和 SYBR一14等都是活精子特异性的荧 成对卵膜 的机械穿透作用 ，通常是用精子活力来评 光探针。 目前 ，实际检测中更倾 向于两类荧光探针 的 价。精子活力是指有 向前运动能力的精子数与总精 联合使用。荧光染色技术是评价精子活率的一个有效 子数的比例。通常正常运动 的精子在普通光学显微 方法 ，但是使用荧光染色技术需要配备荧光染色显微 镜下可直接观察记录 ，但是这种方法存在主观误差 ， 镜，该仪器较为昂贵，因此限制了该技术的应用。 因此精子活力并不是评定精子潜在受精能力 的一个 4 家兔精子质膜完整性 可靠指标。虽然精子活力并不能直接反映其受精能 精子质膜是精子最容易损伤的部位。功能完整的 力，但是精子的正常运动是精子能够到：达受精部位 质膜是精子新陈代谢 ，完成获能、顶体反应 以及与透 的基础。 明带(ZP)结合并穿过 ZP的基础。因此精子质膜是否 现在，精子活力可采用 CASA和精子质量分析仪 完整是区分精子状态的一个间接指标 ，同时也是精子 (SQA)来分析。SQA是通过把精子运动所 引起 的光密 能够发生项体反应的基本条件。目前检测精子质膜的 度值 (OD值 )的变化转化为 电信号，再把：这类波样 电 方法主要有 3种 ：低渗肿胀试验法(HOST)、常规染色 信号转化为精子活动指数(SMI)来评定精子的运动状 法和荧光探针染色法。 态的。SQA可以检测总精子密度、TFSC、正常形态精子 精子质膜能够有选择地运输水分子，当质膜完整 百分率、SMI和精子活动率等指标。SMI值与精子