纳米壳聚糖修饰的开管毛细管电色谱柱的制备及对碱性蛋白质的分离.pdfVIP

Vol.36 高等 学校 化 学 学报 No.4 2015年4 月 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 631~637 doi:10.7503/ cjc 纳纳米壳聚糖修饰的开管毛细管电色谱柱的 制备及对碱性蛋白质的分离 张欢欢,陈继涢,周孙英 (福建医科大学药学院,福州350004) 摘要 采用离子交联法制得纳米壳聚糖粒子溶液,通过静电吸附作用将其修饰于石英毛细管内表面形成涂 层毛细管柱. 通过场发射扫描电子显微镜观察到毛细管内壁有小丘状突起,表明纳米壳聚糖粒子已吸附于 柱内层. 检测了不同pH值下的电渗流变化趋势并与裸柱比较,结果显示修饰后的柱电渗流受到明显抑制, 并在pH4.7 的环境中能产生反向电渗流,该柱在不同pH值下电渗流的相对标准偏差(RSD)6%, 日内、 日间和柱间的RSD分别为1.46%,4.64%和14.43%,表明柱稳定性较好. 通过分离3种中性物质甲苯、苯 酚和硫脲考察了该柱的色谱行为,出峰顺序与其极性大小顺序一致,表明纳米涂层起到极性固定相的作用. 用该柱成功分离了3 种碱性蛋白质溶菌酶、 细胞色素 c 和核糖核酸酶 A,柱效分别为 39481,42610 和 245373 Plate/ m,重现性良好,表明纳米涂层可有效抑制碱性蛋白质的吸附作用. 关键词 纳米壳聚糖;开管毛细管电色谱;碱性蛋白质分离 中图分类号 O657.8 文献标志码 A 毛细管电泳(CE)因具有仪器设备简单、样品和试剂消耗少以及分离速度快等优点,在药物分析、 [1] 食品分析和环境分析等领域得到广泛应用 . 但由于其所用的分离通道 熔融石英毛细管表面的硅 [2] 羟基在pH2 的缓冲液中带有负电荷 ,故在分析过程中易吸附带正电的物质,如生物碱、生物大分 子(尤其是碱性蛋白质)等分析样品,造成对这些样品的分离效果差、峰展宽、 电渗流不稳定、分离效 [3] 率低及重现性差等问题 . 开管毛细管电色谱(OP-CEC)是在石英毛细管内表面采用化学或物理方法 [4] 修饰上一些功能性材料形成固定相薄层,通过改善其化学性质克服以上问题 . 目前,开发高效的涂 层材料并利用简单的涂层方法制备稳定、耐受性高且高效的毛细管涂层柱是开管毛细管电色谱技术研 究的重要方向之一. 纳米材料具有粒径小、 比表面积大等优点,将其涂敷到毛细管柱内壁上进行改性可以有效地提高 [5] 柱效,增加相比且改善分离效果 ,是近年来常用的毛细管涂层材料. 目前用作毛细管涂层的纳米材 [6,7] [8,9] [10,11] [12~14] 料主要有金纳米粒子 、无机纳米复合材料 、磁性纳米粒子 、碳纳米材料 和聚合物纳 米粒子[15,16]. 壳聚糖(Chitosan,CS)是碱性多糖,具有良好的亲水性,其侧链自由氨基可带有正电荷, 同时CS高分子本身有良好的黏附性和成膜能力,而且资源丰富[17,18]. 这些特性使CS可作为毛细管的 修饰优良材料. 已有将壳聚糖或其衍生物修饰于毛细管内表面制成开管毛细管柱,并用于分离大分子 [19] 或有机小分子的报道. 如Zhou等 通过多步化