HIV-1Nef通过ERK%2f+MAPK信号途径促进内皮细胞黏附分子ICAM-1表达.pdfVIP

内 容 摘 要 目的：HIV/AIDS 以发展迅猛、死亡率之高，已成为21 世纪人类灾难性的疾病。 研究 AIDS 的发病机制和治疗方法已迫在眉睫。因此本实验研究HIV-1 的调节基因 Nef 对ECV304 细胞ICAM-1 表达的影响及其信号途径，从而分析HIV-1 感染引起内 皮细胞ICAM-1 高表达的原因，阐明Nef 参与HIV-1 致病的分子机制，为HIV-1 感 染的临床治疗提供实验基础。 方法：1）PCR 方法从HIV-1 HXB2 质粒中扩增HIV-1 Nef 基因，构建真核表 达载体pcDNA 3.1(+)-Nef 。2 ）将pcDNA 3.1(+)-Nef 和pcDNA 3.1(+)质粒（阴性对照） 分别转染血管内皮细胞ECV304 ，应用G418 筛选，获得稳定表达的细胞株。通过逆 转录聚合酶链反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction ， RT-PCR ）、蛋 白质印记（Western blot ），细胞免疫荧光方法鉴定Nef 蛋白的表达。3 ）应用实时定 量PCR （ real-time PC