萎缩性胃炎胃粘膜组织细胞p53及PCNA蛋白表达.pdfVIP

基础医学 5 CN 萎缩性胃炎胃粘膜组织细胞p3及P A蛋白表达 张沥张玲霞 陶梅宋瑛曹广周 (陕西省西安市中心医院消化科 陕西西安 710003) 性胃炎发生的关系。方法采用热盐水灌胃建立大鼠萎缩性胃炎动物模型，连取大鼠腺胃霄奏组织行激光扫描共聚焦显微镜标本悄备 并对组织细胞结构的变化进行动态观察。结果正常姐霄粘膜组织细胞未见阳性表迭。热盐水组在第12周在细胞核中可见p53及Pc烈A 阳性表达，列24周，32周及65周时表达更加明显。双标记中可见两者共同表达。结论熬盐水长期灌胃可导致胃粘虞出现萎靖，p53 及PcNA表述增加，在萎缩性胃炎形成过程中，p53及PcNA蛋白起着重要的调节作用。 PcNA 【关键词】热盐本 胃粘膜 p53 激光扫描共聚焦显截镜 【中图分类号lR573．4 【文献标识码】^ 【文章编号l1674一0742(2008)07(a)一0023一03 研究表明，长期热成饮食可以导致慢性萎缩性胃炎…。慢性 萎缩性胃炎与胃癌发生密切相关，其被列为胃癌前状态{51。现已 公认胃粘膜细胞癌变常需经历萎缩性胃炎／伴肠化一不典型增 生一胃癌的过程16|，此过程中癌基因．抑癌基因的作用意义重大。 加二抗，加二抗不加一抗)，所有切片同时染色。切片一抗加入后， p53蛋白是53kD的核磷酸蛋白质，参与细胞周期和细胞增殖的调 节。正常细胞中p53蛋白含量较低，半衰期短，用一般的免疫组化 方法很难检测。当p53基因发生突变时，所表达的p53蛋白构型 发生变化，在细胞内半衰期延长，导致细胞恶性增殖，此时组织中 40minl0．Olm01．L1的PBs振洗3次，每次5minllO％的缓冲甘油 可检测出p53蛋白14。l。本研究利用激光扫描共聚焦显微镜(1aser confocal scanmng microscope，LSCM)的高分辨性及同屏显示不 同发射波长荧光色的特性，观察p53及PCNA蛋白在大鼠萎缩性用于激发TexasRed，用于图像采集的显微镜物镜为Plan— 胃炎胃粘膜组织细胞中的表达情况。 Neonuar 1材料与方法 像素类型，焦距值设为1．0，若需要更大的放大倍数时，可以选择 1．1 材料 更大的焦距值范围，扫描所用的激光值依据样本不同可以在共聚 7周龄健康、性成熟的雄性sD大鼠(由第四军医动物实验中 焦系统提供的梯值巾选择。 心提供)64只，体质量200～2509，按随机化原则分为3组，即正常2结果 喂养组、正常对照组和热盐水组。每组各20只。采用架式笼养， 光镜结果显示，正常对照组于灌胃8、12，32周时粘膜表面光 恒温(24士1)℃，湿度50％一60％。 滑，无糜烂，固有层无炎细胞浸润，粘膜下层无水肿，肌层无炎细胞浸 1．2 方法 润。正常对照组子灌胃65周时町见粘膜肌层平滑肌轻度增生，呈钉突 大鼠萎缩性胃炎模型的制作：正常喂养组为正常喂养，饮白开 状向粘膜肌层插入，粘膜出现轻度萎缩改变。热盐水组于热盐水灌胃 水；正常对照组为25℃白开水灌胃，每次2．5mL，1次·d—l热盐水后第12周大鼠胃粘膜出现腺体明显缩小，粘膜肌层的平滑肌呈束状增 组为55℃15％氯化钠灌胃，每次2．5mL，1次·d1。实验开始，先 处死4只正常组大鼠，并留取胃大体标本作为对照。以后各组分 别于4周，8周、12周、24周、32周、65周各随机取4只，以观 察粘膜萎缩情况，具体方法参见文献J6|。 免疫荧光及激光扫描共聚焦显微镜检测技术：按身体质量与 给药容积比值为0．5％腹腔注射戊巴比妥麻醉，取出鼠胃，沿大鼠 胃小弯条状取材，包括胃窦及部分胃体，做组织切片。胃粘膜组 织p53及PCNA蛋白表达采用激光共聚焦免疫荧光双标方法。所 圈1 大鼠胃粘膜病理变化(×200) 需仪器(荧光显微镜、恒温箱、荧光分光光度仪、电镜、共焦镜 A：正常对照组，牯膜表面光滑，无糜烂，固有层无