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乙肝病毒表面抗原类病毒颗粒在层析中的结构变化 李岩，马光辉，苏志国木 中国科学院过程工程研究所，北京，100190 幸zgsu@home．ipe．ac．Cll 关键词：乙肝病毒表面抗原；类病毒颗粒；层析；结构变化 摘要：目的：乙肝病毒表面抗原(HBsAg)是乙肝疫苗的有效成分，其在纯化过程中损 失较大，本论文考察其在层析中究竟发生了哪些结构变化，为提高其在层析中的收率以 FF柱上，让这种 及保持其免疫原性提供指导。方法：将HBsAg上到DEAESepharose 类病毒颗粒吸附一定时间后再洗脱下来，然后通过圆二色谱(CD)，凝胶过滤高效液相 聚速率。结果：与微米球相比，纳米球可以被APCs快速的摄取，表现出最大的内吞数 量及颗粒表面积。此外，颗粒的胞内运输方式具有显著的粒径依赖性，纳米颗粒有助于 提高溶酶体加工、酶解抗原的能力，并且上调了利于抗原提呈，T细胞活化的细胞因子 分泌水平。结论：发现HBsAg在DEAE表面中会发生明显的解聚。解聚以后，其二级 结构也会发生明显的变化。研究测定了HBsAg的柱上解聚动力学，在5C时，其解聚速 率为5．52x104$ec～，解聚反应活化能为128kJ／tool。 1．引言 HBsAg类病毒颗粒是乙肝疫苗的主要有效成分。I-IBsAg在层析过程中会受到表面的 吸附作用，使其结构发生改变，从而影响其生物学性质。本研究考察了HBsAg在离子 交换层析(正C)中所发生的结构变化。 2．材料与方法 FF 2．1材料与试剂：HBsAg纯品(华兰生物提供)；离子交换层析介质，DEAESepharose (GE Healthcarre，USA)，高效液相色谱柱，TSK G5000PWxl(300minx7．8rnm)，TSK G3000SWxl(300mmx7．8mm)(TosohBiosepLLC，USA) 1100(USA)；多角度 2．2仪器：圆二色谱Jasco．810(Jasco，Japen)；高效液相，Aglent EOS—OPTILABDSP 激光检测仪，DAWN system(WyattTechnologyCorp．，USA) 2．3动力学测定方法：通过将其HPSEC上的峰面积与在DEAE表面上的接触时间作图， 得到HBsAg的柱上解聚速率。 118 3．结果与讨论 3．1柱上吸附HBsAg二级结构以及四级结构的影响 ^．．一2；5窖pI叠筹dlI罩一lo： 一 w“■州’mta) 铆㈨ 图1HBsAgF罢析前后二级结构的比较图2HBsAg层析前后的HPSEC检测(UV) 由图l可以看出，HBsAg在经过离子交换层析之 后，其二级结构发生了明显的变化。由图2和图3可 以看出，HBsAg在层析之后发生了明显的解聚，尤其 是高盐浓度洗脱的组分中还有部分蛋白发生了聚集。 图3HBsAg,层析前后的HPSEC检测(MALLS) 3．3HBsAg解聚的住上动力学 7O 通过图4可以看出，在 口0。C o 2．5。C 69