不同甲醇流加策略对重组毕赤酵母发酵生产腺苷蛋氨酸的影响.pdfVIP

维普资讯 ·756 · 齐鲁药事 QiluPharmaceuticalAffairs2006 f． ! ．丝 不同甲醇流加策略对重组毕赤酵母发酵生产腺苷蛋氨酸的影响 王水莲，张建勇，刘杰，高振 (山东齐都药业有限公司 淄博 255400) 摘要：目的 考察了不同甲醇流加策略对重组毕赤酵母发酵生产腺苷蛋氨酸(SAMe)的影响。方法 在发酵过程 中改变 甲醇浓度测定外源蛋白表达量。结果 当补加甲醇的量为0．5 时，腺苷蛋氨破表~．t-a高 结论 通过合适的策略控制甲 醇的流加可提高外源蛋白表达量。 关键词：甲醇 外源蛋 白 腺苷蛋氨酸 中图分类号：TQ464．6 文献标识码：A 文章缡号：1672—7738(2006)12—0756--02 EffectsofdifferentmethanolfeedingstrategyonS-Adenosyl—L—methionnineproductionin high—denityfermentationbyrecombinantpichiapastoris WANG Shui*lian，ZHANGJian—yong，LIUJie，GAO Zhen (ShandongQiduPharmaceticalLimitedCorporation，ZiBo，255400) ABSTRACT：OBJECTIVE Fourdifferentmethanolfeedingmethodswereevaluated in theS-Adenosyl—L-methionnine (SAMe)productioninhigh—denityfermentationbyrecombinantpichiapastoris．METHODS Changesthemethanoldensityde— terminationextraneoussourceproteinexpressionquantityinthefermentativeprocess．RESULTS Whenthesupplementmetha— nolquantitywas0．5 ，theSAMeexpressionquantitywashighest．CONCLUSION Mayenhancetheextraneoussourceprotein expressionquantitythroughappropriatedstrategycontrolingmethnaolfeeding． KEYWORDS：Methano1}foreignprotein；S-Adenosyl—L-methionine 自1987年Gregg等首次报道甲醇营养型毕赤酵母表达 1．2方法 将保藏菌种接种到YPD种子培养基中，在 3O℃， 乙型肝炎表面抗原蛋白以来，由于它具有表达率高、外源基 300rpm摇床中培养 16～24h后，按照 I 的接种量接入含 因遗传稳定、产物可分泌和蛋 白翻译后加工正确等优点，已 IOL培养基(10g·L叫酵母膏，10g·L|1蛋白胨，0．05mol· 成为今年来极受青睐的外源蛋白表达宿主系统。腺苷蛋氨 L．1磷酸钾缓冲液 pH6．0，13．4g·L 含有硫氨酸的酵母基 酸(S—Adenosyl—L—methionine，SAMe)是重要的生物中 本氮源，4×10 g·L．1生物素，2g·L一甘油，20g·L 甲 间体 ．生物体中腺苷蛋氨酸合成酶催化ATP和甲硫氨酸生 醇，7．5g·L．1L一 甲硫氨酸)的发酵罐中进行发酵，控制 成 SAMe。SAMe参与转 甲基、转硫、转氨丙基等生化反应， pH5．0，溶解氧 (D())维持 3O 左右，约 20h后，甘油耗尽 是治疗肝硬化、抑郁症、冠心病等疾病的有效药物[1】。